【Wako】ES/iPS培养用血清替代品

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本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子，会导致干细胞分化。使用本产品代替血清，可在ES和iPS细胞培养的同时，保持他们的未分化状态，达到稳定培养。

本产品不含剧毒物质，将其作为普通物质处理。
使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞，可用于制备嵌合体小鼠，并确认其种系传递。

▍▏特点/优势

● 可用于嵌合体小鼠制备，并确认其种系传递。

● 作为血清替代品，用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。

● 不含剧毒物质。

▍▏案例/应用

1. 嵌合体小鼠的制备与种系传递

将组装HaloTag^® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞，用含有StemSure^® Serum Replacement（SSR）的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后，将其注入至ICR小鼠的胚盘胞，并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配，获得F1小鼠。

（1）嵌合体小鼠

收集嵌合体小鼠的血液，用TRITC（四甲基若丹明异硫氰酸盐）对HaloTag^® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag^® 的血液被染色，可确认为嵌合化。

（2）F1小鼠

F1小鼠的血液发现HaloTag^® 存在，可确认用SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。

2. 人iPS细胞201B7的培养

（1）克隆形态与ALP染色

已确认可用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。

<培养基组成>
D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5 ng/mL bFGF

（2）未分化标记的发现

使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培养的人iPS细胞201B7株，确认各种未分化标记（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈阳性。

3. 小鼠ES细胞D3的培养

（1）细胞形态与ALP染色

使用StemSure^® Serum Replacement（SSR）培养小鼠ES细胞D3，能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽，ALP染色呈阳性。

（2）细胞增殖曲线

用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养，比较细胞增殖。

如下图所示StemSure^® 系列与A公司有同等的性能。

< StemSure^® 系列培养基组成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

（使用胶原包被的12孔板）

（3）细胞群倍加数*

使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养，检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

下图显示StemSure^® 系列与A公司产品的细胞群倍加数相同。

*细胞群倍加数 cell population doubling level，缩写PDL，指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

<培养基组成>

StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

（使用胶原包被的12孔板）

（4）未分化标记的检测

使用StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养，各种未分化标记（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈阳性。

<培养基组成>
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

4. 畸形瘤的形成

用StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤，其内部检测出神经组织（外胚叶源）、软骨组织（中胚叶源）、管腔结构纤毛上皮（内胚叶源）。

<培养基組成 >
StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

▍▏产品列表