【Wako】EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基
EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基是一种间充质干细胞（MSC）专用的外泌体（EVs）生产培养基。只要将EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分添加至EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分中配成完全培养基即可使用。本品不含血清及动物源成分， 适用于多种组织来源的MSCs的培养。
▍▏特点
● 比血清培养基的外泌体分泌量高
● 培养的外泌体活性高
● 维持MSC的高存活率
▍▏适用细胞
适用于多种组织来源的MSC
细胞种类
骨髓来源的MSC，脂肪来源的MSC，脐带基质来源的MSC等
▍▏使用方法
*1：往EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基，无动物源成分（产品编号：053-09451）中添加了EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂，无动物源成分（产品编号：298-84001）即为EV-Up™ 完全培养基
6孔板培养
1. 将各种间充质干细胞以5×103 的密度来铺板，然后用增殖培养基（血清培养基或无血清培养基）培养至80-90%汇合。
2. 去除增殖培养基后加入4 mL EV-UP™ 完全培养基。培养3-5日。
3. 回收培养上清，2,000×g离心20分钟，用干净试管收集离心后的上清液，避免吸入沉淀。
※ 可在培养上清中添加1/100的EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂来抑制试管或吸头等对EV的吸附。
4. 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取培养上清中的外泌体。
▍▏应用数据
外泌体粒子数
利用PS亲和法*1从各种培养基的培养上清液中提取外泌体，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技术对外泌体的粒子数进行分析。
*1：在金属离子的存在下，结合分子通过磷脂酰丝氨酸（PS）捕获细胞外囊泡后，再使用螯合剂洗脱的方法。
使用MagCapture™外泌体提取试剂盒PS时，可以通过本方法进行外泌体提取。
*2：Exosome-Depleted FBS
FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 完全培养基，在培养MSC时，释放的外泌体粒子数是D-MEM+10% EV depleted FBS培养的2.6倍左右。另外，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基与血清培养基相比，可以分泌更多的EV。
抗纤维化活性
用TGFβ刺激培养人胎肺成纤维细胞（TIG3细胞），用PS亲和法从不同培养基的培养上清中提取EV，取5×107 particles/mL提取出的EV，用RT-PCR对纤维化标记物（Collagen III，αSMA）的基因表达水平进行定量，以比较抗纤维化活性。
使用FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ 完全培养基的EV，强力抑制了由TGFβ引起的纤维化相关基因的表达。由此可见，FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基能培养出的外泌体活性更高。
细胞存活率
将在血清培养基中扩增培养的人骨髓来源的MSC用不同培养基培养5天，然后检测产生外泌体后的细胞存活率。
FUJIFILM Wako 的EV-Up™ 完全培养基培养的MSC与D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同样高的细胞存活率。
外泌体标志物蛋白表达
用PS亲和法从培养上清液中提取外泌体，并通过ELISA检测标记蛋白CD9、CD63和CD81的表达。
FUJIFILM Wako的EV-Up™ 完全培养基与其他血清培养基相比，不同外泌体标记分子的表达更好。
▍▏产品列表
EV-Up™ MSC专用外泌体生产用培养基
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