【Wako】亲和标签抗体结合磁珠

【Wako】亲和标签抗体结合磁珠

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▍▏抗DYKDDDDK tag抗体磁珠
已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白。
 
特点
● 非特异性结合少
● 可回收N端、C端、Internal全部蛋白
● 可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱
● 无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液

1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的性能
把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。
经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。


M : 标签蛋白
Met : N-terminal Met-DYKDDDDK-BAP
N : N-terminal DYKDDDDK-BAP
C : C-terminal DYKDDDDK-BAP


结果显示：可在不依赖标签位置的情况下，回收重组蛋白。

2. 洗脱法比较抗原回收性能

将DYKDDDDK标签融合蛋白加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。

用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。
 
M：Marker蛋白
Lane1：添加2×SDS sample buffer后，煮沸
Lane2：DYKDDDDK peptide(200 μg/mL)
Lane3：4% SDS solution


结果显示：SDS和DYKDDDDK肽均能洗脱抗原

3. 非特异性吸附蛋白的比较
在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白。
用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。

结果显示：无法检测出非特异性吸附质。


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内参照
下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。

 
蛋白酶抑制剂系列

※ 仅供实验使用，不可用于临床诊断。

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