【Wako】Phos-tag™ 样品预处理攻略

【Wako】Phos-tag™ 样品预处理攻略

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Phos-tag™ SDS-PAGE容易受样品中EDTA、无机盐、表面活性剂等的影响,造成条带弯曲、变形。因此上样前样品需要进行预处理。
没进行预处理的示例
▍▏材料准备
- 待处理蛋白样品*
- 1% DOC(脱氧胆酸钠)
- TCA(三氯乙酸),保存在4℃
- 预冷丙酮
*样品中含有的Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)、蔗糖等可能会引起沉淀
▍▏预处理图解
STEP1:在每200 μL的蛋白样品中加入5 μL 1% DOC

STEP2:涡旋混匀并在37℃下孵育10分钟


STEP3:加入200 μL 20% TCA

STEP4:涡旋混匀并置于冰上5分钟


STEP5:4℃ 15000 rpm 离心10分钟

STEP6:去上清

STEP7:加入500 μL预冷丙酮

STEP8:简单混匀

●  重复步骤5-8
Step 5:4℃ 15000 rpm离心10分钟
Step 6:去上清(丙酮)
Step 7:加入500μL预冷丙酮
Step 8:简单混匀
Step 9:4℃ 15000 rpm离心10分钟
STEP10:吸出丙酮,小心避开沉淀
STEP11:干燥10分钟

STEP12:加入SDS-PAGE样品缓冲液

STEP13:简单混匀
注意
· 若沉淀不能完全溶于缓冲液,加入1M Tris·Cl以提高pH

STEP14:超声处理

STEP15:100℃ 加热5-10分钟
※ 仅供实验使用,不可用于临床诊断。

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