【Wako】LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

【Wako】LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

在血液中NEFA(Non-esterified Fatty Acid:游离脂肪酸)与白蛋白结合,被转运至外周组织,成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。

本产品采用了基于酰基辅酶A合成酶(ACS)、酰基辅酶A氧化酶(ACOD)和3-甲基-N-乙基-N-(β-羟乙基)-苯胺(MEHA)的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。

▍▏检测原理

样品中的游离脂肪酸(NEFA)在酰基辅酶A(Acyl-CoA)和腺苷- 5'-三磷酸二钠(ATP)存在下,通过酰基辅酶A合成酶(ACS)的作用,生成酰基辅酶A、AMP以及焦磷酸(PPi)。生成的酰基辅酶A在酰基辅酶A氧化酶(ACOD)的作用下被氧化,同时生成2,3-反式烯酰辅酶A(2,3-trans-Enoyl-CoA)和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下,与3-甲基-N-乙基-N-(β-羟乙基)-苯胺(MEHA)和4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrine)进行定量氧化缩合,生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度,即可计算样品中的NEFA浓度。

▍▏性能

● 标准曲线范围:0.4~1.97 mEq/L

● 检测时间:约 20 min

● 样品:血清、血浆(小鼠、大鼠、人、犬、猫)

● 所需样品量:4 μL

● 测定波长:550 nm

▍▏试剂盒组成

1. 显色剂A——10 mL用×4瓶

2. 显色剂A溶解液——45 mL×1瓶

3. 显色剂B——20 mL用×4瓶

4. 显色剂B溶解液——90 mL×1瓶

5. 标准溶液(油酸1 mEq/L)——7 mL×1瓶

※ 油酸1 mEq/L=1 mmol

▍▏标准曲线示例

▍▏检测操作方法
微孔板法
按下表条件进行反应。
*1:样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。

*2:普通的样品无需样品盲检。请使用乳糜血清或溶血血清进行测试。
*3:使用板式搅拌机,在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。
▍▏加标回收测试
NEFA的加标回收测试,将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中,n=2。
人样品

小鼠样品

大鼠样品
▍▏样品检测示例
人血清样本
※参考值
20%稀释CD-1(ICR)雄性小鼠正常血清

10%稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清
※参考值
▍▏稀释线性度测试
▍▏产品列表
※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。

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