【Wako】沉默复合体中miRNA及mRNA提取试剂盒

【Wako】沉默复合体中miRNA及mRNA提取试剂盒

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wako
wako 295-74001 297-74201 MagCaptureTM microRNA Isolation Kit Human Ago2 MagCapturerM microRNA Isolation Kit Mouse Ago2
使用本系列试剂盒能简便地从人和小鼠的细胞或组织中提取Ago蛋白结合的microRNA以及靶mRNA，还能从培养上清、血清、血浆中提取游离Ago蛋白结合的microRNA。所提取到的RNA可以应用于qPCR、微阵列检测、NGS等下游实验。本系列包括采用磁珠的MagCapture™ microRNA Isolation Kit，以及采用了硅胶珠法的microRNA Isolation Kit。
MagCapture™ microRNA Isolation Kit（磁珠法）
试剂盒采用磁珠法，可进行简易的免疫沉淀操作并获得良好的重复性。免疫沉淀后提取的RNA可进一步使用离心柱纯化，获得高纯度的RNA。若使用含有抗Ago抗体固定化磁珠的试剂盒，也可使用一步法更加简便地提取RNA（备注：RNA与磁珠不分离）。

操作示意图


应用实例


一、MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2 （人）
1.提取人细胞株中的microRNA
通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染），检测使用本品（MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2）从人K562细胞（1×107 cells）中提取的microRNA（图1）。结果显示，本系列试剂盒可提取得到高纯度的microRNA。通过qPCR对miR-92a进行定量，比较使用本品和硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit，Human Ago2）提取的microRNA量（图2）。本系列试剂盒的离心柱法具有几乎与硅胶珠法相同的microRNA提取能力，而且一步法的microRNA提取能力比硅胶珠法更好。
图1. 对从人K562细胞中提取的microRNA的进行银染检测
图2. 比较从人K562细胞中提取的microRNA量
2.提取人血浆中的游离Ago2蛋白结合microRNA
以qPCR对miR-92a进行定量，比较使用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2和硅胶珠型产品从200 μL健康人混合血浆中提取的microRNA量。结果发现，本试剂盒中的离心柱法具有几乎与硅胶珠型产品相同的microRNA提取能力，而且一步法的microRNA提取量比硅胶珠型高（图3）。
图3. 比较从人血浆中提取的microRNA量
3.提取microRNA的靶标mRNA
向miR-122低表达的肝癌细胞株HepG2细胞（5×105 cells）导入人工合成的miR-122或调控的荧光素酶siRNA（Luc siRNA），提取了分别用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2和硅胶珠型产品制备的Ago2 IP RNA，以及用ISOGEN® 制备的total RNA。运用qPCR法比较各种RNA中含有的miR-122量（图4）与其靶标mRNA（Aldo A mRNA是miR-122靶标之一，以GAPDH内参作校正）量（图5）。与硅胶珠型产品一样，本品提取的RNA中富集了miR-122和Aldo A mRNA，因此，可以利用本品提取microRNA的靶标mRNA。另一方面，用ISOGEN® 制备的total RNA中的Aldo A mRNA会随着miR-122的增加而分解并减少。
图4. miR-122提取量的比较
图5. 靶标mRNA提取量的比较
二、MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 （小鼠）
1.从小鼠细胞株中提取microRNA
通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染），检测用本试剂盒（MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2）从小鼠P388D1细胞（2×107 cells）中提取的microRNA（图1）。结果显示，本品能提取出高纯度的microRNA。另外，以qPCR法对miR-92a进行定量，比较使用硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2）提取到的microRNA量（图2）。结果发现，本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力，而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好。
图1. 对从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA的进行银染检测
图2. 比较从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量
2.从大鼠血浆中提取游离Ago2蛋白结合microRNA
通过qPCR对miR-92a进行定量，比较使用本品以及硅胶珠型产品从200 μL大鼠血浆中提取到的microRNA量。本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力，而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好（图3）。
图3. 比较从大鼠血浆中提取的microRNA量

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