【Wako】如何实现自动提取细胞外囊泡/外泌体

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Wako 293-96401 294-84101 290-84103 131-19491 137-19493 295-96601 058-09261 050-09461

外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不仅参与排放生物体内的废弃物，同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同，EV的特性及其内含物（核酸、蛋白质、脂质等）也有所差异，目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”，即通过体液样品诊断疾病。

为实现液体活检的开发和应用，需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限，从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。

因此，Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本试剂盒采用与金泽大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”^1），配合自动提取设备，可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。

参考文献

1）Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).

产品概要

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡（EV）的试剂盒，适用于自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV，因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening，HTS)。

特点

● 配合自动提取设备，同时可分离和纯化EV的样品上限为96份

● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”，可分离高纯度且低损伤的EV

适用样品（示例）

● 细胞培养上清

● 血清

● 血浆

● 尿液

● 唾液

适用自动提取设备

（分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备）

● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）

与手动款试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的区别

比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号：290-84103），两者的区别如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（参考“性能数据”）

原理

PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法，使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4。

通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂，可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。

实验方案

使用KingFisher™ Flex分离纯化EV（进行从亲和反应到洗脱一系列过程时）

※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行，并使用新的tip comb进行洗脱，可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。

实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。

数据

与手动试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比较的性能数据

通过NTA，比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数

【结果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。

通过ELISA，比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （产品编号：298-80601）确认EV的回收率。