【ScienCell】人脾内皮细胞（HSEC）产品使用攻略
人脾内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脾内皮细胞
（HSEC）
脾脏在红细胞的周转中发挥重要的功能，它能清除红细胞，代谢血红蛋白，并回收铁元素。脾脏也对血液中的抗原产生初级免疫反应，并在 白髓中合成抗体。与其他内皮细胞类似，人脾脏内皮细胞（Human Spley Endothelial Cells，HSEC）构成了血液与下方组织之间的天然界面。研究表明，脾脏内皮细胞、脾脏错构瘤和毛细血管瘤之间存在一定的联系。脾脏内皮细胞也为树突状细胞的发育提供支持的微环境。此外，内皮细胞-巨噬细胞相互作用的改变，可导致脾脏中年轻红细胞的快速破坏，提示，脾内皮细胞在单核吞噬细胞系统中可能发挥更为重要的作用。HSEC可通过VWF/Factor VIII和CD31(PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HSEC在提供的ECM完全培养基（包含基础培养基、1% ECGS、5% FBS和1% P/S）培养。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、ECGS、FBS和P/S按比例混合）。
2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HSEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500），将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HSEC培养材料
参考文献
[1] Zukerberg LR, Kaynor BL, Silverman ML, Harris NL. (1991) “Splenic hamartoma and capillary hemangioma are distinct entities: immunohistochemical analysis of CD8 expression by endothelial cells.” Hum Pathol. 22: 1258-61.
[2] Despars G, O'Neill HC. (2006) “Splenic endothelial cell lines support development of dendritic cells from bone marrow.” Stem Cells. 24: 1496-504.
[3] Trial J, Rice L, Alfrey CP. (2001) “Erythropoietin withdrawal alters interactions between young red blood cells, splenic endothelial cells, and macrophages: an in vitro model of neocytolysis.” J Investig Med. 49: 335-45.
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