【Promega】TNT® 偶联网织红细胞裂解物系统

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Promega

PROMEGA L4600 L4601 L4610 L4611 L4950 L5010 L5020 L1171 L1170 L2081 L2080 L5540

Promega 提供的 TNT® 系统来源于真核生物（兔网织红细胞、小麦胚芽和昆虫细胞）以及原核生物大肠杆菌提取物（参见表 3）。

通常情况下，使用大肠杆菌提取物可达到最高水平的蛋白产生速率。然而，真核表达系统往往会产生活性更高的真核蛋白。因此，在选择无细胞表达系统时，需考虑靶蛋白的来源这一问题。

NR：不推荐

1. TNT® E.coli Systems 的 DNA 模板需要 Shine Dalgarno 核糖体结合位点（RBS）。

2. 真核 TNT® Systems 的 DNA 模板应优选包含用于翻译起始的 Kozak 共识序列。

3. CMM：犬微粒体膜。

4. 对照 DNA 含有萤火虫萤光素酶基因。萤光素酶活性由萤光素酶检测试剂（Luciferase Assay Reagent，Cat.#E1500）检测。

5. 通过添加 Mg2+ 和 K+ 可以进一步优化翻译反应。

6. SP6 环状质粒比 T7 或 T3 环状质粒产生更高的产量；T7 或 T3 线性化质粒可以被当作模板；SP6 线性化质粒不建议使用。

7. 不建议用于包含 SP6 的模板。

8. 用于包括 T7 终止序列的 T7 环状质粒；否则优选线性化质粒；对于 SP6 模板，只有环状质粒。

9. 仅用于线性化模板。

TNT® Coupled Reticulocyte Lysate Systems

我们可提供两种类型的 Rabbit Reticulocyte Lysate Transcription and Translation (TNT®) System：TNT® Coupled(T7、T3、SP6)System 和 TNT® Quick Coupled(T7、SP6)System。这两种系统之间的主要区别是 TNT® Quick Coupled System 提供了TNT® 快速混合母液 (master mix)，其中包含一个试管中所需使用的所有反应组分，而 TNT® Coupled System 的所有反应组分则均在单独的试管中予以提供 ( 参见下图 7)。TNT® T7 Quick for PCR DNA 是一种快速、方便使用的耦联 TNT® 系统，旨在用于表达使用PCR 生成的 DNA模板。该系统性能强健，并且能够表达分子量在10~150kDa 之间的多种蛋白。裂解物和进行TNT®反应所需的所有试剂一并提供，包括RNA聚合酶。在使用这些系统进行分析时，首先将DNA直接加入TNT®裂解物中，并在50µl的反应体系中于 30℃孵育 60~90分钟。