【Promega】TNT® Coupled Wheat Germ Extract System
【Promega】TNT® Coupled Wheat Germ Extract System
描述
TNT® Coupled Wheat Germ Extract System ( TNT® 麦胚提取物转录 / 翻译偶联系统 ) 为研究者提供了一个可应用于真核生物的无细胞蛋白表达方法,它是一个转录 / 翻译偶联的、在一个试管中即可完成实验的系统。TNT® 提取物系统大大简化了体外翻译过程,缩短了获得翻译结果所需的时间。使用麦胚提取物进行体外翻译的常规方法一般采用由 SP6 或 T7 RNA 聚合酶启动子在体外合成的 RNA 作模板,整个过程包括多个独立的反应,且每个反应之间好几个步骤。TNT® 提取物系统将转录反应的组分直接整合到翻译反应中,形成混合物,避开了常规方法的繁琐步骤。
反应原理
TNT® 小麦胚芽提取系统有三种配置,用于转录和翻译从 SP6或 T7 RNA 聚合酶启动子下游克隆的基因。使用该系统,用0.2–2μg 模板编程 50μl 反应,并在 30℃下孵育 1.5 小时。以下模板可用于此系统:
• 含有 SP6 RNA 聚合酶启动子的环状质粒 DNA。
• 含有 T7 RNA 聚合酶启动子的线性化质粒 DNA。
• 含有 T7 RNA 聚合酶启动子和 T7 转录终止子的环状质粒
DNA。
特点
• 产生比标准小麦胚芽系统多 2 至 6 倍的蛋白质。
• 1.5 小时内从线性化 DNA 中生产蛋白质。
• 可以选择启动子。
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