【Promega】支链氨基酸检测：BCAA-Glo™ Assay
支链氨基酸（Branched chain amino acids ; 亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸）作为蛋白质合成的底物、能量来源和必需的信号分子，在生物学许多领域中发挥着重要作用，如促进胰岛素释放，促进生长激素释放等。BCAA-Glo™ Assay 是一种基于生物发光的快速、灵敏的支链氨基酸检测方法，帮助您检测各种生物样品类型中支链氨基酸的微小变化。
■ 检测原理
BCAA-Glo™ Assay 使用亮氨酸脱氢酶在 BCAA 存在下产生NADH，然后使用生物发光 NADH 检测技术检测 NADH。结果是与样品中起始 BCAA 浓度成比例的光信号。
上图：亮氨酸滴定曲线。生物发光信号（RLU）与样品的 BCAA 含量成比例。使用试剂盒中提供的亮氨酸阳性对照制作标准曲线，可以确定待测样品中 BCAA 的精确浓度。
■ 检测样本类型
细胞裂解物、培养基样品、组织匀浆、血浆和血清；
■ 产品特点
检测支链氨基酸微小变化：线性范围 50nM to~50μM， 最大检测窗口 (S/B) ≥ 200；
操作简便：无需收集细胞、离心或使用离心柱，简单的“加入 -检测”流程，并且兼容 96 和 384 孔板。
■ 检测流程
使用 BCAA-Glo™ 检测支链氨基酸只需将检测试剂添加到样品中并孵育即可。可以使用标准通用的读板仪分析发光信号。该检测与细胞裂解物、培养基样品、组织匀浆、血浆和血清样品兼容。
■检测 BCAA 仅需少量细胞
对于细胞内 BCAA 检测，简化了样品制备步骤，以便在同一孔中进行细 胞裂解和随后的 BCAA 检测。不需要细胞收集、离心或旋转柱。只需从 平板细胞中取出培养基，用 PBS 洗涤，然后加入酸溶解细胞。裂解产物 可以直接在孔中或转移到新的 96 或 384 孔板后进行分析。
将 A549 细胞以所示数量分为 4 份，铺到 96 孔板的孔中。在孔内裂解后， 用 BCAA-Glo™ 检测每个样品中的 BCAA 含量。
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