【Promega】HiBiT 蛋白标签系统介绍
HiBiIT 蛋白标签系统
将生物发光应用于蛋白分析
使用 HiBIT 蛋白标签系统,可开发出操作简便、灵敏度高的蛋白定量方法,来检测蛋白丰度或定位的变化。HiBiT 系统简化了活细胞中的蛋白标签,提供了一种精简、无抗体检测方案,仅需使用光度计进行信号定量。HiBiT 技术凭借其测定内源性表达水平灵敏度高和仅需加入单一试剂的便利,为蛋白生物学研究人员开辟了无限可能。
原理
HiBiT 是一个由 11 个氨基酸构成的肽标签,可以连接到任何目的蛋白(POI),可在10分钟或更短时间内使用生物发光试剂进行检测。检测试剂含有一个无活性的萤光素酶亚基 LgBiT,其能快速与 HiBIT结合,产生一种高活性萤光素酶,
用于内源性生物学的高灵敏蛋白定量技术
较宽的线性动态范围可准确定量 HiBiT 标签蛋白,不受蛋白表达水平的影响。HiBiT 检测系统的检测限<10-19摩尔,支持在内源性表达水平对低丰度蛋白进行定量。
【参考文献】
1.Schwinn, M.k. et al. (2020) A simple and scalable strategy for analysis of endogenous protein dynamics. PSc Rep. 10(1):8953
2.Boursier, M.E. et a. (2020) The luminescent HiBiT peptide enables selective quantitation of G protein-coupled ligandenaagementand internalization in livina cells.y, Biol. Chem. 295(15):5124-5135
3.Riching, K.M. et al. (2018) Quantitative Live-Cell Kinetic Degradation and Mechanistic Profiling of PROTAC Mode of Action.ACS Chem Biol.13(9):2758-2770
4.Sasaki, M. et a/. (2018) Development of a rapid and quantitative method for the analysis of viral entry and release using a NanoLuc luciferase complementation assay. Virus Res. 243:69-79
5.Schwinn, M.k. et a. (2018): CRlSPR-Mediated Tagging of Endogenous Proteins with a Luminescent Peptide AcS chem Bio.13(2):467-474
6.Oh-Hashi, K. ef al. (2017) Application of a novel HiBiT peptide tag for monitoring ATF4 protein expression in Neuro2a cells Biochem Biophys Rep.12:40-45
7.Rouault, A. A. J. et al. (2017) Regions of MRAP2 reguired for the inhibition of orexin and prokineticin receptor signaling Biochim Biophys Acta.1864:2322-2329
HiBiT 标签与定量工作流程
HiBiT 标签蛋白的定量:HiBiT 标签蛋白定量仅需“加入 - 读数”测定,无需抗体,操作简单。(A)通过 LgBiT亚基的瞬时或稳定共表达与其中一种非裂解性 Nano-Glo® 底物,实时动力学研究可达 72 小时。(B)裂解检测试剂定量 HiBiT 标签蛋白的总量,而细胞外检测试剂检测细胞表面或分泌型的标签蛋白的量。(C)通过使用 HiBiT 印迹试剂,在常规蛋白免疫印迹分析膜上快速测定 HiBiT 标签蛋白的大小。
通过内参报告基因归一化来控制特异性
HiBiT NanoDLR™
Nano-Glo®HiBiT 双萤光素酶®报告基因检测系统可以在同一孔中对 HiBiT 标签蛋白和萤火虫萤光素酶(Fluc)进行多重检测。该检测系统可最大程度减少或消除由转染效率、细胞数量、细胞活性、温度或检测时间等因素导致的实验变异性,从而提高数据质量。检测 HiBiT目的蛋白(POI)的调控降解时,该方法可以区分蛋白表达水平总体变化导致的特异性效应。
POI的编码序列(coding sequence ofthe POl, GOl)克隆到一个带有N端或C端 HiBiT 标签的多克隆位点(MCS)。HiBIT 融合蛋白的终止密码子之后是一个IRES序列,该序列能够使来自相同 mRNA的非融合 Fluc进行组成性共表达第一步(1),加入含有 LgBiT 蛋白的 ONE-GIo™ EX 试剂,定量 Fluc。其可裂解细胞,提供 Fluc 底物,并将 HiBi7标签转换为 NanoBiT®萤光素酶。第二步(2),向样品中加入NanoDLR® Stop&Glo®Reagent,淬灭 Fluc 信号并提供 NanoBiT® Substrate。
用 TK启动子驱动的 HiBiT-BRD4和 Fluc 的双顺反子表达构建体瞬时转染 HEK293 细胞。(A)用靶向 BRD4的PROTAC 化合物 dBET1 处理细胞,会导致 HiBiT-BRD4 特异性降解,而 Fluc对照不会发生降解。(B)另一方面用有毒化合物星形孢菌素处理,两种蛋白信号均出现了非特异性下降。
特点和优势
标签小(11 个氨基酸,1.3kDa)
●降低对融合蛋白伴侣功能的潜在影响
●大大简化了 CRISPR/Cas9 基因组敲入的工作流程
便于用 CRISPR/Cas9 进行内源性蛋白检测
●研究内源性调控下的蛋白质
●无需克隆
●方案可优化
简单、快速的检测方案
●一步均质检测(“加入-读数”)
●无需抗体,无洗涤步骤
●适用于高通量筛选
多种检测模式
●裂解终点法检测模式
●活细胞形式(细胞内和细胞外),具有可延长时程分析选项
灵敏度及定量
●Sub-attomole 级灵敏度,能够检测内源性水平的蛋白
●线性检测范围大(>7 logs)
产品列表
Product |
Size |
Cat. # |
Nano-Glo®HiBiT 裂解检测系统 |
10 ml |
N3030 |
100 ml |
N3040 |
|
10x100 ml |
N3050 |
|
Nano-Glo®HiBiT 细胞外检测系统 |
10 ml |
N2420 |
100 ml |
N2421 |
|
10x100 ml |
N2422 |
|
Nano-Glo® HiBiT 印迹系统 |
100 ml |
N2410 |
HiBiT 对照蛋白 |
100 µl |
N3010 |
Product |
Size |
Cat. # |
Nano-Glo® 活细胞测定系统 |
100 assays |
N2011 |
1000 assays |
N2012 |
|
10,000 assays |
N2013 |
|
Nano-Glo® Vivazine™ 底物 |
0.1 ml |
N2580 |
1 ml |
N2581 |
|
10 ml |
N2582 |
|
Nano-Glo® Endurazine™ 底物 |
0.1 ml |
N2570 |
1 ml |
N2571 |
|
10 ml |
N2572 |
|
Nano-Glo® 扩展的活细胞底物试验包 |
0.2 ml |
N2590 |
LgBiT 亚基的共表达 | ||
LgBiT Expression Vector [CMV / Hygro] |
20 μg |
N2681 |
LgBiT-LentiB3 Transfer Vector |
20 μg |
Please Enquire |
HaloTag®-LgBiT Expression Vector [CMV / Hygro] |
20 μg |
Please Enquire |
HEK293 LgBiT Cell Line (stable) |
1 each |
N2672 |
HeLa LgBiT Cell Line (stable) |
2 vials |
Please Enquire |
Jurkat LgBiT Cell Line (stable) |
2 vials |
Please Enquire |
Product |
Size |
Cat. # |
HiBiT NanoDLR™ | ||
Nano-Glo® HiBiT Dual-Luciferase™ Reporter System |
10ml |
Please Enquire |
Nano-Glo® HiBiT Dual-Luciferase™ Reporter System |
100ml |
Please Enquire |
pBiT4.1-C [HiBiT-IRES-luc2/CMV/Blast] Vector |
20 μg |
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pBit4.2-C [HiBiT-IRES-luc2/TK/Blastl Vector |
20 μg |
Please Enquire |
pBiT4.3-C [HiBiT-RES-luc2/PGK/Blast] Vector |
20 μg |
Please Enquire |
pBiT4.1-N [HiBiT-IRES-luc2/CMV/Blast] Vector |
20 μg |
Please Enquire |
pBit4.2-N [HiBiT-IRES-luc2/TK/Blastl Vector |
20 μg |
Please Enquire |
pBiT4.3-N [HiBiT-IRES-luc2/PGK/Blast] Vector |
20 μg |
Please Enquire |
HiBiT 融合载体 | ||
pBiT3.1-N [CMV/HiBiT/Blastl Vector |
20 μg |
N2361 |
pBiT3.1-C[CMV/HiBiT/Blastl Vector |
20 μg |
N2371 |
pBiT3.1-secN [CMV/HiBiT/Blastl Vector |
20 μg |
N2381 |
pFN38K HiBiT CMV-neo Flexi Vector |
20 μg |
N2401 |
pFC37K HiBiT CMV-neo Flexi° Vector |
20 μg |
N2391 |
pFN39K secHiBiT CMV-neo Flexi Vector |
20 μg |
N2411 |
自噬 LC3 HiBiT 报告基因检测系统 | ||
U2OS Autophagy LC3 HiBiT Reporter Cell Lineand Detection System |
1 kit* |
GA1050 |
HEK293 Autophagy LC3 HiBiT Reporter Cell Lineand Detection System |
1 kit* |
GA1040 |
Autophagy LC3 HiBiT Reporter Vector and Detection System |
1 kit* |
GA2550 |
Janelia Fluor 549 HaloTag Ligands |
5ug |
GA1110 |
3x5ug |
GA1111 |
|
Janelia Fluor 646 HaloTag Ligands |
5ug |
GA1120 |
3x5ug |
GA1121 |
|
* 包括 10mL Nano-Glo® HiBiT 裂解检测系统 |
Product |
Size |
HiBiT 靶细胞杀伤作用检测 | |
LgBiT Protein |
10ml |
0.1ml | |
HaloTag"-HiBiT Vector [CAG / Blast] |
2μg |
HaloTag®-HiBiT Target Cells | |
Raji Cells, Propagation Model |
2 vials |
Ramos Cells, Propagation Model |
2 vials |
A549 Cells, Propagation Model |
2 vials |
H929 Cells, Propagation Model |
2 vials |
SK-BR-3 Cells, Propagation Model |
1 vial |
K562 Cells, Propagation Model |
1 vial |
U937 Cells, Propagation Model |
1 vial |
LDH-HiBiT Target Cells | |
Raji Cells, Propagation Model |
2 vials |
Raji CD19-KO Cells, Propagation Model |
2 vials |
Ramos Cells, Propagation Model |
2 vials |
Ramos CD19-KO Cells, Propagation Model |
2 vials |
OVCAR-3 Cells, Propagation Model |
2 vials |
SC-0V-3 Cells, Propagation Model |
2 vials |
A549 Cells, Propagation Model |
2 vials |
T2 Cells, Propagation Model |
2 vials |
PBMC ADCC Bioassays | |
PBMC ADCC Bioassay Kit (Raji) |
1 kit* |
PBMC ADCC Bioassay Kit (Ramos) |
1 kit* |
PBMC ADCC Bioassay Kit (A549) |
1 kit* |
PBMC ADCC Bioassay Kit (H929) |
1 kit* |
PBMC ADCC Bioassay Kit (SK-BR-3) |
1 kit* |
*包括细胞培养基、胎牛血清(FBS)和 10mL Nano-Glo® HiBiT 细胞外检测系统。 |
Product |
Size |
Cat. # |
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody |
1x 100ug |
N7200 |
5x 100ug |
N7210 |
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