【Merck】Amicon® Ultra超滤管应用方案：抗体/蛋白标记
抗体/蛋白标记
标记后净化与浓缩的标准化高效操作方案
蛋白制备一路走来，可谓千辛万苦，每个阶段采用不同的方案会带来不同的得率、纯度，不断地优化方案以期获得更高性价 比的策略，大家都是如履薄冰、精益求精。高品质抗体的制备尤其有挑战性，在传统的蛋白操作中遇到的各种问题会被进一命科学为此探索并建立了以超滤管为核心的简单快捷标准操作，为抗体/蛋白标记后处理提供了最佳方案。
用超滤管进行抗体标记反应后的净化处理
使用Amicon® Ultra超滤管经过几轮渗滤即可有效地从抗体偶联反应中去除未掺入的标记物，制备得到纯净的抗体，同时对产物进行浓缩。
以下是标准化的超滤管离心操作，推荐用于>=1mg的抗体样品 【蛋白操作与此类同】：
●将2 mL含有1 mg荧光标记抗体的溶液加载到两个Amicon® Ultra-4 mL 10 kDa超滤管中，并以 4,000 x g离心10分钟。
●用水将截留在内管的样品（每管约 50 μL）重新稀释至2 mL，然后再次离心。并重复此步骤2次。
●每次离心后保存截留物和滤液的样品，以便使用紫外-可见光谱进行SDS-PAGE分析和定量。
结果
超滤作为凝胶过滤的替方案在蛋白标记反应后净化操作中效果良好。
1小时完成小量抗体标记反应后净化处理方案
研究者希望市售的各种标记抗体/蛋白能满足他们多样化的实际需要，但有时候也不得不用蛋白标记试剂盒DIY制备符合自己特殊要求的抗体/蛋白。传统方法包括从抗体中去除BSA等载质蛋白、进行标记反应、去除未结合的多余标记物、透析、浓缩，整个流程需要长达3天的时间，且在多次转移样品过程中会造成蛋白质大量损失。
采用默克生命科学创新的Amicon® Pro纯化超滤管，全部操作可以在1小时内完成！得益于其一体化设计，不需要转移样品，抗体的得率有了显著提高。采用Amicon® Pro进行小量抗体标记不仅又快又好，较之凝胶过滤和透析方案，在产量和操作方便性等方面都更令人满意。
以下是标准化的Amicon® Pro操作，推荐用于<1mg的抗体样品 【蛋白操作与此类同】：
抗GAPDH抗体使用Amicon® Pro系统进行生物素化，用于在蛋白质印迹中成功检测GAPDH。取EGF刺激的A431细胞裂解液(0.25-4µg)等分试样通过SDS-PAGE分离，转印到Immobilon® -P膜上，并使用各种间接检测对在SNAP i.d. 2.0系统中探测β微管蛋白。所有情况下使用相同数量的一抗（GAPDH特异性）。
产品订购信息
截留分子量 MWCO | 4ml Amicon® Ultra超滤管（96/PK） | 15ml Amicon® Ultra超滤管（96/PK） | 0.5ml Amicon® Ultra超滤管（500/PK） |
3,000 | UFC800396 | UFC900396 | UFC5003BK |
10,000 | UFC801096 | UFC901096 | UFC5010BK |
30,000 | UFC803096 | UFC903096 | UFC5030BK |
50,000 | UFC805096 | UFC905096 | UFC5050BK |
100,000 | UFC810096 | UFC910096 | UFC5100BK |
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