【Merck】高丰度蛋白去除
体液中的低丰度蛋白的种类和量的变化，是疾病检测和研究的重要内容。免疫亲和性分离高丰度蛋白(HAP) 已被证明是克服蛋白质浓度宽动态范围和实现低丰度蛋白(LAP) 检测最有效的方法。
人类血浆蛋白质组中高丰度及中等丰度蛋白分布图。
14种高丰度蛋白及50种中等丰度蛋白可分别由IgY14柱（A）和SuperMix柱（B）去除。血浆中的蛋白丰度百分比是由LC-MS/MS实验数据分析而来。除此之外的其他蛋白都可以被定义为低丰度蛋白。
下面介绍用商品化试剂盒去除体液（血浆、血清或脑脊液）中富含的血清白蛋白和IgG的方法。
需要的耗材及设备
• ProteoExtract Albumin/IgG去除试剂盒（货号122642）
• 15ml离心管
• 小试管（混合样品用）
操作指南
一、样品前处理（稀释）
• ProteoExtract白蛋白/IgG去除色谱柱适合处理20～60μl的血浆/血清。对于常见血浆/血清样品，建议上样量为35μl。采用其它样品（例如脑脊液CSF）时，可进一步优化上样量。
• 对于高白蛋白含量的血浆/血清样品，请以20μl样品/色谱柱为起始量。
• 对于低白蛋白含量的血浆/血清样品，可选用60μl样品/色谱柱。
• 用ProteoExtract白蛋白/ IgG结合缓冲液将血浆/血清样品稀释10倍。
• 色谱柱上样量不得少于350μl。
二、色谱柱预处理
1. 取下ProteoExtract白蛋白/IgG去除柱蓝色盖子。将色谱柱倒置在纸巾上，倒掉色谱柱存储缓冲液（不戴手套即可轻松移除盖子）。
2. 取下色谱柱下端，放入15ml离心管（收集管）中。
3.向色谱柱中添加850μl ProteoExtract TM白蛋白/IgG结合缓冲液，使其在重力作用下流过柱床。如果未流动，可盖上盖子施加少许压力，直到第一滴液滴出现。
4. 丢弃收集管。
5.滴加稀释样品之前，将活化的色谱柱放在新样品收集管中。
三、白蛋白/ IgG去除
1. 将稀释的样品加入活化的色谱柱。让样品在重力作用下流过柱床。将滤过组分收集在样品收集管中。
2. 洗涤色谱柱，加入600μl结合缓冲液。在重力作用下流过柱床。将冲洗液与滤过液收集在同一收集管中。在缓冲液完全通过柱床之前，不要进行下一步操作。
3. 另取600μl结合缓冲液重复洗涤步骤。将第二次的冲洗液与滤过液收集在同一收集管中。
4. 样品收集管中即为已去除了白蛋白和IgG的样品。
四、用于后续分析的样品制备
●蛋白质定量
可在280nm处读取吸光度估算蛋白质含量。为更准确地定量蛋白质，可使用任何不受所含磷酸盐缓冲液影响的方法，例如Non-Interfering Protein Assay Kit试剂盒（货号488250）或BIOQUANT Kit试剂盒（货号1.10306）。
●1D电泳
1D电泳通常无需浓缩已去除白蛋白的样品即可进行。如果需要浓缩，我们建议使用ProteoExtract蛋白沉淀试剂盒（货号539180）。其它标准蛋白质浓缩方法也可用，但需要避免导致蛋白质产量下降。
●2D凝胶电泳
使用ProteoExtract蛋白质沉淀试剂盒（货号539180）沉淀已经去除白蛋白/血清的蛋白质，可去除多余的盐，这样再进行2D电泳可获得理想的结果。也可尝试任何其它标准蛋白净化方法，但需要注意避免可能的样品电导率升高。
有关2D凝胶电泳条件的详细信息，请参考2D凝胶设备制造商说明。
●液相色谱
去除了白蛋白/IgG的血浆/血清样品可直接应用于任何不受低浓度磷酸盐缓冲液影响的液相色谱技术。如果需要置换缓冲液或浓缩，可借助于超滤。
五、默克生命科学提供针对不同物种的高/中丰度蛋白去除试剂盒
样本 | 去除的蛋白 | 产品描述 | 包装规格 | 目录号 |
人、兔、大鼠、小鼠、猪；血浆/血清/脑脊液等 | 白蛋白和 IgG | ProteoExtract®Albumin/IgG Removal Kit | 12次 | 122642 |
ProteoExtract® Albumin/IgG Removal Kit, Maxi | 20次 | 122643 | ||
人、小鼠；血浆/血清 | 白蛋白和 IgG | ProteoPrep® Blue Albumin & IgG Depletion KitProteoPrep® | 25次 | PROTBA |
人、小鼠、豚鼠；血浆/血清 | 白蛋白和 IgG | Immunoaffinity Albumin & IgG Depletion Kit | 10次 | PROTIA |
人；血浆/血清 | 白蛋白和 IgG | PureProteome™ Albumin/IgG Depletion Kit | 约12次 | LSKMAGD12 |
人；血浆/血清 | 白蛋白 | PureProteome™ Albumin Magnetic Beads | 约13次 | LSKMAGL10 |
- | - | PureProteome™ Magnetic Stand | 1个 | LSKMAGS08 |
- | - | LSKMAGS15 | ||
人；血浆血清 | 丰度排在前 14位的高丰度蛋白 | Seppro® IgY14 human | 100次 | SEP010 |
SEP020 | ||||
SEP030 | ||||
SEP040 | ||||
人；血浆血清 | 中丰度蛋白质 | Seppro® Supermix human | 100次 | SEP050 |
SEP060 | ||||
小鼠；血浆/血清 | 丰度排在前 7种的高丰度蛋白质 | Seppro® Mouse | 100次 | SEP090 |
小鼠；血浆/血清 | 中丰度蛋白质 | Seppro® Supermix Mouse | 100次 | SEP100 |
大鼠；血浆/血清 | 丰度排在前 7位的高丰度蛋白质 | Seppro® Rat | 100次 | SEP120 |
SEP130 | ||||
植物 | Rubisco | Seppro® Rubisco | 100次 | SEP070 |
SEP080 |
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