【Merck】球体和类器官细胞活力鉴定方案

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Merck CBA415 Calcein-AM

原理简介

细胞活力鉴定试剂盒是一种快速简单的三色检测方法，用于测量细胞活力。该试剂盒由Calcein-AM（染活细胞）、碘化丙啶（染死细胞）和Hoechst 33342（染所有细胞）组成。该试剂盒针对3D细胞培养（球体、人体类器官和3D基质）和2D细胞培养（多种细胞类型）进行了优化。该试剂盒可用于流式细胞仪、荧光显微镜和荧光酶标仪。该试剂盒根据质膜完整性和酯酶活性确定细胞的活力。因此，我们试图通过使用专为球状体设计的光学透明剂Visikol® HISTO-M™ 来补救由3D球状体不透明度所引起的光散射。本文介绍的高内涵筛选方法将Visikol HISTO-M组织透明剂用于在Corning 96孔球形微孔板中，形成HepG2球状体。

优势：

• 针对3D细胞培养、球体培养、类器官培养、2D细胞培养和流式细胞术进行了测试和优化

•易于使用和操作简便

•Calcein AM和Hoechst染料的强度比其他产品更强

操作指南

球体和类器官细胞活力鉴定方案

一、试剂耗材准备

细胞活力鉴定试剂盒（货号：CBA415）

二、实验步骤

1. 将6 ml细胞培养基和6 ml PBS以1:1的比例混合。向该混合物中加入5 μl Calcein AM（ Vial 1，绿色盖子）、20 μl碘化丙啶（Vial 2，红色盖子）和8 μl Hoechst 33342（Vial 3，蓝色盖子）以制备12 ml染料溶液。

2. 涡旋染料溶液以彻底混合组分。

3. 吸走细胞培养基，在每个孔中加入适量的染料混合物。

4. 在37°C孵育60分钟。

5. 用合适的荧光显微镜分析细胞活力，或者使用合适的系统进行自动图像采集和分析。HepG2球体的死活染色见图2，hiPSC来源结肠类器官的死活染色见图3。

图1. NIH3TS细胞在8孔载玻片中培养，并用细胞活力检测试剂盒染色。上面一行显示用Calcein-AM (A)、碘化丙啶 (B)、Hoechst 33342 (C) 和合并明场图像(D)染色的细胞的活培养物。下图(E-H)显示用70%乙醇固定的细胞，然后用Calcein-AM (E)、碘化丙啶 (F)、Hoechst 33342 (G) 和合并明场图像(H)的试剂盒染色。

图2. HepG2球体在8孔室载玻片中培养，并用细胞活力检测试剂盒染色。上面一行显示用Calcein-AM (A)、碘化丙锭 (B)、Hoechst 33342 (C) 和合并明场图像(D)染色的活细胞球体培养物。下图(E-H)显示用70%乙醇固定的细胞，然后用Calcein-AM(E)、碘化丙啶 (F)、Hoechst 33342 (G)和合并的明场图像(H)染色

图3.人iPSC来源的结肠类器官在24孔板中的25 μl圆顶中培养，并用细胞活力检测试剂盒染色。上面一行显示用Calcein-AM(A)、碘化丙啶(B)、Hoechst 33342(C)和合并明场图像(D)染色的活培养物。下图(E-H)显示了用70%乙醇固定的类器官，然后用Calcein-AM(E)、碘化丙啶(F)、Hoechst 33342(G)和合并的明场图像(H)染色。

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