【Corning】 354248 产品使用方法
Corning® Matrigel® Basement Membrane Matrix High Concentration (HC), LDEV-free
（354248）
基底膜是存在于活体细胞下方的薄层细胞外基质。Corning Matrigel Matrix High Concentration (HC)是从Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肉瘤中提取的可溶化基底膜制备物，这是一种富含细胞外基质蛋白的肿瘤。其主要成分是层粘连蛋白(laminin)，其次是IV型胶原(collagen IV)、肝素硫酸酯蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans)和entactin/nidogen等。Corning Matrigel Matrix HC还含有TGF-β、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活剂等生长因子，这些生长因子在EHS肿瘤中自然存在。Corning Matrigel Matrix HC对正常和转化的依赖于锚定的上皮细胞和其他细胞类型的附着和分化都具有有效作用。包括神经元、肝细胞、Sertoli细胞、鸡晶状体和血管内皮细胞等。Corning Matrigel Matrix HC会影响成年大鼠肝细胞的基因表达，以及小鼠和人乳腺上皮细胞的三维培养。它是几种肿瘤细胞侵袭性分析的基础，支持体内外周神经再生，并为体内外血管生成的研究提供必要的基质。Corning Matrigel Matrix HC还支持免疫抑制小鼠体内人类肿瘤的繁殖。
应用：
表 1 354248产品信息
解冻方法
Corning Matrigel Matrix HC在22℃至35℃下会迅速凝胶。在冰上的4℃下过夜解冻（在冰箱中，Matrigel可能在稍高的温度下凝胶化）。在使用前保持产品冷藏，并在准备Corning Matrigel Matrix HC时使用预冷的移液管、枪头和管子。如果将凝胶状态的Corning Matrigel Matrix HC放置在4℃的冰上24-48小时，它可以重新液化。
解冻Corning Matrigel Matrix HC后，轻轻摇动小瓶以确保物质均匀分散。使用无菌技术操作。将解冻的Corning Matrigel Matrix HC小瓶放置在无菌区域，喷洒70%乙醇于小瓶盖上并晾干。可以使用预冷的移液管轻轻吸取Corning Matrigel Matrix HC以确保均匀性。将剩余的物质分装到适当的小管中，使用预冷的管子，并立即重新冷冻。避免多次冻融。
Corning Matrigel Matrix HC可以作为薄凝胶层（0.5mm）使用，细胞可以在其上培养。也可以将细胞培养在Corning Matrigel Matrix HC内，使用1mm厚的层。过度稀释会导致薄而非凝胶化的蛋白质层。这对于细胞附着可能有用，但在分化研究中可能不太有效。Corning Matrigel Matrix HC可以通过皮下注射到小鼠体内（Corning Matrigel Plug Assay）来评估不同化合物的体内血管生成活性。高蛋白浓度促进肿瘤的生长，并使Corning® Matrigel® Plug在注射后保持完整。这使得注射的肿瘤和/或血管生成化合物局限于原位分析和/或将来的切除。
注射方案
●在将Corning Matrigel Matrix HC和Corning Matrigel/细胞悬浮液注射到小鼠之前，保持它们尽可能处于冷环境中，但避免冻结。在整个过程中，保持Corning Matrigel和Corning Matrigel/细胞悬浮液的无菌性非常重要。
●对于每只接受注射的小鼠，在冰上将细胞（2 x 105或更多）和Corning Matrigel Matrix HC混合在最终体积为0.5毫升的溶液中。
●细胞应尽可能少地体积。通常，将250 cells/mL与250 μL冰冷的Corning Matrigel Matrix HC混合。
●针对组织样本使用19G注射针，针对培养细胞使用23G注射针，将细胞皮下注射到无胸腺小鼠体内。注射应迅速进行，以防止Matrigel凝固。
●在抽取时旋转注射器以防止泄漏。由于堵塞，针头需要经常更换。
细胞回收
使用Dispase（目录号354235）或Corning细胞恢复溶液（目录号354253）可以最高效地恢复生长在Corning Matrigel Matrix HC上的细胞。Corning细胞恢复溶液可以在冰上7小时内降解Matrigel Matrix，或者使用Dispase，这是一种金属酶，可以轻柔释放细胞，使其可以进行连续培养。
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