【Corning】354263 产品使用方法
Corning® Matrigel® Matrix High Concentration (HC), Growth Factor Reduced (GFR) LDEV-free
（354263）
基底膜是存在于体内细胞下方的薄的细胞外基质。Corning Matrigel Matrix高浓度减生长因子（GFR）是从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）小鼠肉瘤中提取的溶解的基底膜制剂，该肿瘤富含细胞外基质蛋白质。其主要成分是层粘连蛋白，其次是IV型胶原蛋白，肝素硫酸蛋白聚糖和接触素/网素。Corning Matrigel Matrix-HC GFR还含有TGF-β、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活物以及EHS肿瘤中自然存在的其他生长因子。Corning Matrigel Matrix-HC GFR对于正常和转化的依赖于锚定的上皮样细胞和其他细胞类型的附着和分化都是有效的。这些细胞包括神经元、肝细胞、Sertoli细胞、鸡晶状体和血管内皮细胞。Corning Matrigel Matrix-HC GFR会影响成年大鼠肝细胞、血管内皮细胞以及小鼠和人类乳腺上皮细胞的基因表达。它是几种肿瘤细胞侵袭试验的基础，可以支持体内周围神经再生，并为体外和体内研究血管生成提供必要的基质。Corning Matrigel Matrix-HC GFR还支持免疫抑制小鼠中人类肿瘤的体内扩增。Corning Matrigel Matrix高浓度GFR可用于移植未分选乳腺细胞，以及嵌入在Corning Matrigel Matrix中的分选的上皮亚群。该基质还被用作癌症干细胞模型，并显示可以增强体内肿瘤生长速率。
Corning Matrigel Matrix-HC GFR是为那些需要纯化并更详细地表征的重组基底膜制剂而开发的，与Corning Matrigel Matrix相比。制备该产品的方法有效地降低了多种生长因子的水平，但TGF-β可能与IV型胶原结合，并/或以潜在形式与主要成分分离，在纯化过程中保持不变。主要成分：层粘连蛋白、IV型胶原和接触素（网素）在该过程中保留，而肝素硫酸蛋白的水平降低了40-50%。以下表格显示了Corning Matrigel Matrix中生长因子的值与典型批次的Corning Matrigel Matrix高浓度GFR相比。
表 1 354263产品信息
溶解方法
Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR和所有与之接触的培养器皿或培养基都必须预先冷藏/冷冻，因为Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR在10°C以上会开始凝胶。始终将Corning Matrigel Matrix保持在冰上。
将Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR的小瓶浸入冰中并放入4°C的冰箱的后部，过夜解冻。一旦Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR解冻，轻轻摇晃瓶子以确保物质均匀分散。始终将Corning Matrigel Matrix保持在冰上。使用无菌技术处理。将解冻的Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR小瓶放在无菌区域，喷洒70％乙醇于瓶盖上，并晾干。
可以使用预先冷却的移液管轻轻移液Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR，以确保均匀性。将Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR分装到管中，当Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR堵塞尖端或导致移液管测量不准确时，请更换移液管头。如果将凝胶状的Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR放置在4°C的冰上24-48小时，可以重新液化。可以将Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR用作薄凝胶层（0.5 mm），在其上播种细胞。细胞也可以在Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR内培养，使用1 mm的层厚。过度稀释会导致薄而非凝胶的蛋白质层。这可能对细胞附着有用，但在分化研究中可能不太有效。可以通过皮下注射到小鼠体内（Corning Matrigel Plug Assay）来评估不同化合物的体内血管生成活性。高蛋白质浓度促进肿瘤生长，并且使Corning Matrigel Plug在注射后保持完整。这使得注射的肿瘤和/或血管生成化合物定位于原位分析和/或将来切除。
注射方案
注意：Corning Matrigel Matrix产品的蛋白质浓度是批次特定的，并在分析证书上提供。为了获得一致的结果，请通过计算所需的特定蛋白质浓度（mg/mL）来稀释Corning Matrigel Matrix产品。为了保持凝胶一致性，我们建议不要将Corning Matrigel Matrix稀释到低于3 mg/mL。使用冷冻的无血清培养基来稀释Corning Matrigel Matrix。冷冻的培养基可以直接加入冻结的Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR小瓶中，并按照“使用”部分建议的方法进行解冻。通过上下移液或在冰中轻轻摇晃瓶子来混匀。
●在将Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR和Corning Matrigel Matrix/细胞悬液注射到小鼠之前，保持它们尽可能冷却，但不要冻结。在整个过程中，保持Corning Matrigel和Corning Matrigel Matrix/细胞悬液尽可能无菌非常重要。
●对于每只接受注射的小鼠，在冰上将细胞（2x105个或更多）和Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR混合，最终体积为0.5 mL。
● 细胞应该尽可能少的体积。通常，将250 µl含有2x106 cells/mL的冷培养基与250 µl预冷的Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR混合。
● 使用19G针头对无胸腺小鼠进行皮下注射组织样本，使用23G针头对培养细胞进行注射。注射应迅速进行，以防止Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR凝固。
●在抽出时旋转注射器以防止泄漏。由于堵塞，针头需要经常更换。
细胞回收
Corning Dispase (Cat. No. 354235), Corning Cell Recovery Solution (Cat. No. 354253)。使用Corning Cell Recovery Solution或Corning Dispase可以最高效地回收生长在Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR上的细胞。Corning Cell Recovery Solution能够在冰上7小时内解聚Corning Matrigel Matrix High Concentration GFR，而Corning Dispase是一种金属酶，可以轻柔地释放细胞，从而实现细胞的连续培养。
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