【Corning】356255 产品使用说明
Corning® Matrigel® Matrix for Organoid Culture, Phenol Red-free, LDEV-free
（356255）
类器官为复杂的三维结构，可以模拟体内器官的功能。通过干细胞和祖细胞及其分化后的子代的扩增和自组织形成。类器官反映机体内诸多相互作用，如细胞间、细胞基质和组织特异性的生理功能。它们在基础生物学、疾病建模、药物发现、个体化医学和再生医学领域具有广泛的应用。
Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture是从Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）小鼠肉瘤中提取的可溶化基底膜制备物，该肿瘤富含细胞外基质蛋白，包括Laminin（主要组分）、Collagen IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、entactin/nidogen和几种在正常EHS肿瘤中发现的生长因子。Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture已广泛应用于干细胞培养、细胞附着和分化、血管生成试验、肿瘤生长和组织工程等多个领域。Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture是一种优化的细胞外基质，可以支持类器官的生长和分化，经过优化用于类器官培养，经验证可支持健康和/或疾病组织中的小鼠和人类器官的生长和分化，每个批次都具有特定的弹性模量值，指示形成凝胶的硬度，并经过验证可以形成在类器官培养协议中常用的稳定的3D液滴。
表 1 356255产品信息
溶解方法
Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture, Phenol Red-free用于类器官培养。解冻方法是将其浸入冰中，并放在2°C至8°C的冰箱中过夜。溶解后轻轻摇晃（避免产生气泡）以确保物质均匀分散，在无菌环境下进行分装，期间，Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture的分装物一直放置在冰上。分装前用预冷的移液器轻轻吸取，以确保均质性，当发生堵塞移液器尖端或导致移液器测量不准确时，更换吸头。分装后将备用的分装品存储于在-80°C。
在肠道类器官中的应用
使用HUB类器官技术方法，证明Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture在无血清IntestiCult™类器官生长培养基（小鼠）中支持小鼠肠道类器官（Mouse intestinal organoids, MIO）的培养超过7个传代。Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture中培养的类器官中，显示出典型的萌发形态，并包含表达特定表面标记的分化肠道细胞。
使用方法：
冻存的小鼠肠道类器官（STEMCELL Technologies）根据制造商的说明解冻、培养和传代在IntestiCult类器官生长培养基（STEMCELL Technologies）中进行。简单来说，冻存的MIO片段的一个小瓶被解冻，离心，并将类器官沉淀悬浮在冷的IntestiCult器官样体生长培养基中（100 µL）。然后，在MIO中加入冷的Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture用于类器官培养（100 µL），并上下移液混合。使用预润湿的200 µL移液头，在每个孔中形成圆滴，将1：1的MIO/Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture混悬液（50 µL）加入预孵育的Costar® 24孔板。然后，将含有类器官液滴的板放入湿度控制的培养箱（37°C和5% CO2）中，孵育10分钟，然后轻轻地向每个孔中加入IntestiCult类器官生长培养基（750 µL）。培养基每周更换3次。使用EVOS® XL细胞成像系统（Thermo Fisher）每天观察MIO的形态。在5到7天后，使用Gentle Cell Dissociation Reagent（STEMCELL Technologies）对类器官进行传代，并按照上述方法在Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture中培养类器官液滴。
使用HUB器官样体技术方法和IntestiCult™类器官生长培养基，在含有Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture用于类器官培养的1:1混合物的圆滴中培养小鼠肠道类器官（MIOs）。在三个不同批次的Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture中培养的MIOs显示出典型的肠道器官样体形态，包括萌发（图A）。此外，对培养在三个不同批次的Corning Matrigel Matrix for Organoid Culture中的MIOs的嵌入切片进行H&E染色（Lot 1：第7代；Lot 2：第9代；Lot 3：第7代），显示出高度有序的结构，具有管腔和萌发形态（图B）。
在Corning® Matrigel® Matrix for Organoid Culture中培养的小鼠肠道器官样体的形态学。（A）培养中的MIOs的代表性图像。（B）在三个不同批次的Corning® Matrigel® Matrix for Organoid Culture中培养的Day 7 MIOs的石蜡切片的代表性光镜照片（Lot 1：第7代；Lot 2：第9代；Lot 3：第7代）
图片来自Culture of Mouse Intestinal Organoids in Corning® Matrigel® Matrix for Organoid Culture Application Note（https://www.corning.com/catalog/cls/documents/application-notes/CLS-AN-542-A4.pdf）
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