【Corning】354250 ECM补充物制备

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Corning 细胞外基质 ECM 生物涂层 Biological Coatings Matrigel Matrix Cell-Tak 细胞和组织粘附剂产品胶原蛋白 Collagen 层粘连蛋白 Laminin PuraMatrix BioCoat Poly-D-Lysine Fibronectin Synthemax vitronectin substrate 354250

（Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel）

（354250）

Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel (CorningPuraMatrix) 是一种用于创建定义的三维微环境的合成基质，可用于各种细胞培养实验。为了实现最佳的细胞生长和分化，需要确定该材料和生物活性分子（例如生长因子、细胞外基质（ECM）蛋白和/或其他分子）的适当混合比例。CorningPuraMatrix由标准氨基酸（1% w/v）和99%水组成。在生理条件下，CorningPuraMatrix的肽组分自组装成为具有 nm级纤维结构的3D水凝胶，平均孔径为50-200 nm。该水凝胶可以方便地在培养皿、多孔板或细胞培养插入物中形成。

CorningPuraMatrix除了可以提供3D细胞培养，还能够进行更简单的2D培养。许多细胞类型在CorningPuraMatrix表面培养时形成适当的3D形态，与细胞夹心培养系统相比，简化了开发3D体外模型系统所需的工作。研究表明，与2D培养的细胞相比，形成3D结构的细胞更接近其体内对应物。CorningPuraMatrix允许定义的微环境更好地再现体内环境，从而提高在高通量环境中进行的实验所得结果的预测质量。

研究表明，CorningPuraMatrix支持肝祖细胞、大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）和海马神经元的分化，同时促进内皮细胞的管状生成。研究还表明，CorningPuraMatrix支持各种原代细胞（例如神经元、成纤维细胞和角质形成细胞）和转化细胞（例如MG-63、SH-SY5Y、HEK293和NIH3T3）的附着。其他潜在的应用包括干细胞增殖和分化、肿瘤细胞迁移以及组织再生的体内分析。CorningPuraMatrix具有生物相容性、可吸收性，并且不含动物来源的材料和病原体。对于动物体内研究，可将可溶性材料注射到体内，随后在与生理环境接触时形成3D水凝胶。

表 PuraMatrix™ Peptide Hydrogel 354250产品信息

注意：在使用之前，通过涡旋或在浴式超声波中超声30分钟来降低Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel原液（1% w/v）的黏度。如果有气泡存在，则将原液在离心管中高速离心。

细胞表面培养ECM补充物制备

纤维连接蛋白（Fibronectin）补充方案

由于在无盐情况下纤维连接蛋白不溶解，因此必须“涂覆”在纤维上。

① 在5毫升无菌ddH2O中重悬5毫克Corning Fibronectin（Cat. No. 356008）。

② 使用10,000 MW截止Slide-A-Lyzer®（Pierce Cat. No. 66453）在室温下对dPBS进行过夜透析，去除Ca2+和Mg2+。

③ 在添加Corning Fibronectin之前，通过轻柔的移液混合以彻底混匀Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel，并将其加入到所需浓度的适当培养皿中。有关建议体积，请参见下表。

④ 通过在Corning PuraMatrix™ Peptide Hydrogel上方加入Corning Fibronectin/PBS溶液（1 mg/ml）持续60分钟，使Corning PuraMatrix凝胶化。

⑤ 用细胞培养基冲清洗5分钟，吸去液体，然后小心地将细胞加到基质顶部。

Collagen Ⅰ补充方案

胶原蛋白I（Collagen I）可溶于1 mM HCl，因此可以在凝胶化之前与Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel混合）

① 使用截止10,000 MW的Slide-A-Lyzer®在4°C下，将胶原蛋白I（乙酸中的原液，Cat. No. 354236）进行过夜透析，透析液为1 mM HCl。

② 将所需量的胶原蛋白I/HCl加入Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel中，并通过轻柔的移液混合，加入适当的培养皿中。

③ 通过小心地将培养基加入细胞培养插件的侧壁或培养皿中，使其凝胶化。

④ 一旦凝胶形成，使用移液器小心地去除培养基，并在接下来的一个小时内再更换两次，以将Corning PuraMatri Peptide Hydrogel平衡到生理pH值，然后将细胞种植在基质上方。

细胞培养板中CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的推荐使用体积如下

注意：用于播种（CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel/细胞/蔗糖混合物）的CorningPuraMatrix Peptide Hydrogel的终体积应该加倍，以进行细胞封装。

Laminin补充方案

Laminin储备液含0.05 M Tris-HCl，0.15 M NaCl，pH 7.4。

●低浓度laminin（Laminin, mouse (Cat. No. 354232)和Ultra-pure Laminin, mouse (Cat. No. 354239)）。

① 以所需浓度与细胞培养基混合。

② 将混合物小心地直接加到在细胞培养插件或培养皿中的Corning PuraMatri Peptide Hydrogel（在存在或不存在细胞的情况下制备）上，以促进凝胶化。

● Laminin/Entactin，高浓度（HC），10 mg/ml（Cat. No. 354259）。

① 直接向Corning PuraMatri Peptide Hydrogel中加入所需量的HC Laminin。当HC Laminin稀释使盐浓度≤1 mM时，Corning PuraMatri Peptide Hydrogel不会发生凝胶化。

② 在添加Laminin后诱导凝胶化

③ 一旦凝胶形成，使用移液器小心地去除培养基，并在接下来的一个小时内再更换两次，以将Corning PuraMatri Peptide Hydrogel平衡到生理pH值，然后将细胞种植在基质上方。

Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel细胞封装混合物中ECM的补充

照下面详细说明进行操作，将ECM引入细胞封装混合物中。对于浓度为0.25％的Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel，建议使用细胞培养插件以便于培养基更换并确保水凝胶不被破坏。建议将低于0.25％的Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel浓度用于神经元和内皮细胞的封装。对于其他细胞类型，建议尝试一系列浓度水凝胶进行封装。

将ECM添加到细胞培养板或细胞培养插件的细胞封装混合物中：

① 将laminin或胶原蛋白（纤维连接蛋白不适合封装，但可以涂覆在已封装在Corning PuraMatrixPeptide Hydrogel中的细胞样本上）加入细胞/蔗糖混合物中，使其最终浓度为1-5 µg/ml（2倍所需的最终浓度）。

② 对于细胞封装，按照Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel细胞封装过程（细胞培养板和细胞培养插件）中的方案进行操作。

其他细胞品类