【Corning】Corning® 超低吸附（ULA）球形微孔板
原理简介
超低吸附(ULA)微孔板可维持球状体形态并提高球状体培养结果的可重复性。由于具有亲水性且天然带电，可最大限度减少细胞吸附、蛋白吸收和酶活化。Corning® ULA球形微孔板采用新型专利设计，可提供全包式培养环境来制备、培养、检测和分析球状体，且无需操作和转移精细结构。该微孔板具有光学透明的圆底和不透明黑色板壁，并包被亲水性、生物惰性和不可降解的Corning® ULA表面。不透明的侧壁和网格化底部设计可减少孔间交叉干扰和背景荧光/发光。产品提供96、384和1536孔规格。96孔规格兼容HTS Transwell® -96组织培养系统，用于3D免疫肿瘤模型高通量检测。
其设计有利于维持球状体形态并提高球状体培养结果的可重复性，具备如下特性：
• 共价结合的水凝胶层可有效抑制细胞吸附
•最大限度降低细胞吸附、蛋白吸收和酶活化的表面
•无细胞毒性、生物惰性和不可降解的表面
•不可转置且带有凝结环的板盖可减少污染机会
•单独编码便于识别
•大小一致方便堆放
•伽玛辐照灭菌和无热原认证
操作指南
肿瘤球状体形成实验方案
相对于2D形式，体外3D细胞培养模型是公认更具生理相关性的系统。为了重构天然肿瘤微环境特征，可以在Corning球形微孔板中培养癌细胞。该微孔板将Corning超低附着表面与创新孔几何结构相结合，为在同一微孔板中（无需转移步骤）制备、培养和检测3D多细胞球状体提供了一种理想的工具。
本实验方案描述了一种以96孔球形微孔板制备和培养肿瘤球状体的基本方法。这种基础培养和测定实验方案适用于所有球形微孔板。表4提供了将96孔培养体积缩小为384孔和1536孔形式的建议体积。由于接种体积和密度可能因细胞类型和下游应用而异，因此建议针对检测方案优化条件。
一、试剂耗材准备
Corning® 球形微孔板，96孔圆底（货号：CLS4515）
二、实验步骤
注：可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL圆底聚苯乙烯试管，以实现单细胞悬浮。
2. 为每个接种密度（表 5）准备5 mL稀释液，以便每个时间点的每个接种密度可接种8个孔（四个96孔球形微孔板）。
3. 将100 µL细胞悬液分装至孔中，每个浓度的8个孔。对照孔分别加入100 μL的无细胞生长培养基。
注：球形微孔板可以使用多通道移液管手动接种*，或使用液体进样针自动接种**。对于96孔和384孔球形微孔板，仅需手动添加液体。1536孔球形微孔板建议采用自动液体进样。
* 在手动接种过程中，请确保移液管吸头不会刮伤孔的底部或侧面，以免损坏Corning® 超低附着表面涂层。
**如果使用自动液体进样器，请增加稀释体积以考虑灌注仪器体积和管道的长度(10 mL)。
4. 将球形微孔板置于设置为37 °C和5% CO2 的加湿培养箱中。
5. 观察评估 0、24、48 和72小时时间点的球状体形成和生长，并进行细胞活力测定。
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