【Corning】354250 Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel培养细胞样品荧光染色
（Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel）
（354250）
Corning® PuraMatrix™ Peptide Hydrogel (CorningPuraMatrix) 是一种用于创建定义的三维微环境的合成基质，可用于各种细胞培养实验。为了实现最佳的细胞生长和分化，需要确定该材料和生物活性分子（例如生长因子、细胞外基质（ECM）蛋白和/或其他分子）的适当混合比例。CorningPuraMatrix由标准氨基酸（1% w/v）和99%水组成。在生理条件下，CorningPuraMatrix的肽组分自组装成为具有 nm级纤维结构的3D水凝胶，平均孔径为50-200 nm。该水凝胶可以方便地在培养皿、多孔板或细胞培养插入物中形成。
CorningPuraMatrix除了可以提供3D细胞培养，还能够进行更简单的2D培养。许多细胞类型在CorningPuraMatrix表面培养时形成适当的3D形态，与细胞夹心培养系统相比，简化了开发3D体外模型系统所需的工作。研究表明，与2D培养的细胞相比，形成3D结构的细胞更接近其体内对应物。CorningPuraMatrix允许定义的微环境更好地再现体内环境，从而提高在高通量环境中进行的实验所得结果的预测质量。
研究表明，CorningPuraMatrix支持肝祖细胞、大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）和海马神经元的分化，同时促进内皮细胞的管状生成。研究还表明，CorningPuraMatrix支持各种原代细胞（例如神经元、成纤维细胞和角质形成细胞）和转化细胞（例如MG-63、SH-SY5Y、HEK293和NIH3T3）的附着。其他潜在的应用包括干细胞增殖和分化、肿瘤细胞迁移以及组织再生的体内分析。CorningPuraMatrix具有生物相容性、可吸收性，并且不含动物来源的材料和病原体。对于动物体内研究，可将可溶性材料注射到体内，随后在与生理环境接触时形成3D水凝胶。
表 PuraMatrix™ Peptide Hydrogel 354250产品信息
免疫荧光染色
该方案可用于插件或板中的3D或2D表面细胞培养。对于某些细胞培养方式（例如，具有透明底部的24孔和96孔微孔板），可以直接对样品进行成像，而无需将凝胶转移到玻璃载玻片上。在某些情况下，可能需要将凝胶转移到玻璃载玻片上进行成像分析（例如，使用具有半透明膜的细胞培养插件时）。
注意：为了获得强烈和特异的信号，有必要彻底封闭抗体与Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel的非特异性结合，并允许抗体通过肽支架扩散。因此，需要延长封闭和孵育时间，增加抗体浓度，并进行多次洗涤。
① 轻柔地从培养孔中移除培养基。
② 使用4％戊二醛固定凝胶中的细胞，固定30分钟。
③ 用PBS洗涤。
④ 在封闭溶液（PBS + 10％胎牛血清）中孵育12-16小时。
a. 封闭溶液应每隔几个小时更换三到四次，然后过夜。如有必要，可进行额外更换。
⑤ 在封闭溶液中加入一抗。在4℃下过夜孵育。
a. 与2D培养中的细胞相比对于存在于3D Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel样品中的细胞，建议使用较高浓度的一抗。通过滴定抗体确定最佳浓度。
b. 以一个没有一抗的样本作为负对照，评估背景染色。
⑥ 在封闭溶液中至少洗涤四次（每次洗涤两小时）。
⑦ 在封闭溶液中加入二抗。
a. 如步骤⑤a所述，对于Corning PuraMatrix Peptide Hydrogel中的细胞，建议使用较高浓度的二抗。
b. 孵育四小时。
⑧ 再次用PBS或封闭溶液多次（四至六次）洗涤，每次洗涤至少一小时。
⑨ 直接在细胞培养容器中对样品进行成像分析。如有必要，使用刮刀小心地将凝胶从容器中取出并放置在玻璃载玻片上进行显微镜分析。如果使用低百分比的凝胶（例如<0.5％），在转移凝胶时要非常小心。
形态染色（罗丹明-鬼笔环肽/DAPI）
① 轻柔地从插件或培养孔中移除培养基。
② 使用4％戊二醛固定凝胶中的细胞，固定20分钟。
③ 轻轻去除固定液并丢弃。
④ 使用PBS洗涤1次。
⑤ 加入所需染料。
a. 建议在PBS中使用160 nm的罗丹明-鬼笔环肽，每孔或每插入物加入300微升。
b. 盖上并在过夜。
c. 加入1倍浓度的DAPI，孵育1小时，然后用PBS洗涤2次。
⑥ 去除PBS并按照上述免疫染色的描述进行成像分析
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