【Ucallm】Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜产品说明

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Ucallm Ublot™ W3N21 W3N23 W3N41 W3N43

Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜

产品信息

货号	产品名称	产品孔径	产品尺寸
W3N21	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜	0.2 μm	30 cm×1m
W3N23	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜	0.2 μm	30 cm×3m
W3N41	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜	0.45 μm	30 cm×1m
W3N43	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜	0.45 μm	30 cm×3m

产品介绍

Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜是一种纯净的、无支撑的硝酸纤维素微孔膜，用于从各种凝胶基质中转移蛋白质和核酸。

这款转印印迹膜有两种孔径：0.22μm 和 0.45μm，可结合各种分子量的物质：

0.45μm孔径：适用于大多数蛋白质样品，并提供更高的检测灵敏度。
0.22μm孔径：适用于分子量低于20,000的蛋白质，可更好地吸附和保留小蛋白质。

Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜的拉伸强度使它相比于其他品牌的NC膜撕裂和开裂的可能性更小，此膜对蛋白和核酸都具有较高的结合容量，使其能较好的应用于免疫及核酸检测。

蛋白质印迹的常用方法和免疫检测

推荐转印操作步骤（半干转印为例）

1. 用SDS PAGE凝胶分离蛋白质样品和蛋白Marker。

2. 小心地裁切和放置凝胶，并将凝胶在冷转移缓冲液中平衡5~20分钟。

3. 将膜和滤纸切成适合凝胶的尺寸，在冷转移缓冲液中平衡2-3分钟直至可以使用。

4. 依次组装转印装置，转印夹子→海绵垫→滤纸→预湿的膜→SDS-PAGE凝胶→滤纸→海绵垫→转印夹子，每放置一层要注意避免起皱、折叠或存在气泡（可利用切胶板等工具轻轻赶压气泡，使每层紧密贴合）

5. 按照所用转印装置说明设置运行条件等，开始转印。

6. 转印结束后，取出印迹膜，并在超纯水中短暂冲洗去除凝胶碎屑。印迹膜可以风干储存，也可以立即使用用于免疫印迹检测步骤。

免疫检测

一些关键因素，如蛋白质浓度、封闭溶液和抗体浓度可能需要个性化优化。

1.将印迹膜置于封闭缓冲液中，在温和搅拌下孵育1小时。商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中稀释一抗。

2.将印迹膜置于稀释的一抗溶液中，并在温和搅拌下室温孵育1小时（或4℃过夜孵育）。

3.用洗涤缓冲液（添加Tween®-20表面活性剂的缓冲液（TBST或PBST））3-5次，每次5分钟。准备商品化抗体稀释液、洗涤或封闭缓冲液稀释二抗。

4.将印迹膜置于稀释的酶标记二抗溶液中，室温孵育1小时。

5.用洗涤缓冲液洗涤印迹膜3-5次，每次5分钟。

6.将印迹膜放入干净的容器中并加入适当的检测试剂。

7. 按照检测所用试剂说明书操作，孵育1-5分钟。

（1）对于HRP或AP化学发光试剂，将印迹膜暴露于X光胶片或使用成像系统获取数字图像。

（2）对于显色检测，加入试剂并等待信号出现。

更多产品信息

NC膜性能及应用

产品	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜
描述	纯硝酸纤维素膜
最佳用途	蛋白转移
同样适用于	核酸检测
优点	高灵敏、低背景
结合作用	疏水和静电
亲疏水性	亲水性
蛋白结合能力	0.22μm：＞160 μg/cm²(BSA)
蛋白结合能力	0.45μm：＞140μg/cm²(BSA)
固定方法	Western转移、点/狭线杂交、烘烤和紫外交联（核酸）

实验所需试剂

1. 甲醇

2. 超纯水

3. 转印缓冲液推荐

半干转移：25 mM Tris Base，192 mM Glycine，（pH 8.3，含10-20%醇）
干转移：48 mM Tris，39 mM Glycine，（pH 9.2，含10-20%醇）

4. 封闭缓冲液：商品化快速封闭剂或0.5-5%洗涤缓冲液封闭剂（牛血清白蛋白、酪蛋白或脱脂奶粉）

5. 洗涤缓冲液：含0.05-0.1% TWEEN ® 20的磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris缓冲液（TBS）（PBST或TBST）。

PBS成分：10 mM Na₂HPO₄.12H₂O，pH 7.2，0.9% NaCl
TBS成分：10 mM Tris，pH 7.4，0.9% NaCl

Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜

使用注意事项

1. 操作薄膜时，务必戴上手套，以免留下指纹。

2. 使用钝性钳子防止膜损伤。

3. 在切割或处理过程中，将保护纸（淡蓝纸）与薄膜一起保存，但润湿膜时保护纸应丢弃。

4. 小心搬运，避免薄膜表面出现划痕。不要折叠薄膜。

5. Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜用转移缓冲液润湿浸泡。

6. 蛋白质转移后，用超纯水清洗印迹膜，以消除残留杂物。

7. 印迹膜可以风干并在4°C下储存数月（以备日后使用），也可以立即使用。

蛋白质转移方法的比较

_	湿转	半干转
条件	浸泡在缓冲液中的膜凝胶堆	滤纸浸湿缓冲液
缓冲液体积	0.5升或更高，具体取决于系统	每个小凝胶约0.05升
转移时间	慢（一个小时或更久）	快（7-45分钟）
运行	恒压或恒流	恒流
凝胶平衡时间	不需要，但建议	每个小凝胶的平衡至少15分钟
典型连续缓冲液名称/成分	Towbin缓冲液，pH 8.3 25 mM Tris，192 mM Glycine	Bjerrum Shafer Nielsen缓冲液，pH 9.2 48 mM Tris，39 mM Glycine
所需缓冲液系统	连续（单个缓冲器）	连续（单个缓冲器）或不连续（3个缓冲区）
典型非连续缓冲液名称/成分	N/A	阳极缓冲液I: 300mM Tris，pH 10.4 阳极缓冲液II: 25mM Tris，pH 10.4 阴极缓冲液：25mM Tris，40mM氨基己酸，pH 9.4
醇百分比	10-20%	10-20%
SDS 含量	0.0-0.05%	0.0-0.05%

转移缓冲液中的醇（甲醇、乙醇或异丙醇）具有两个重要作用：

稳定凝胶尺寸
从蛋白质分子中剥离络合的十二烷基硫酸钠 (SDS)，从而改善蛋白质与膜的结合。

然而，对于较大的蛋白质或存在溶解性问题的蛋白质，建议降低酒精浓度，并在转印缓冲液中添加少量 SDS。这种调整有助于增强蛋白质从凝胶中的洗脱，同时在转印过程中保持蛋白质的溶解性。

免疫测定

免疫测定是一种基于抗体的技术，用于定量检测和鉴定印迹膜上的蛋白质或抗原。该过程包括以下步骤：

1. 封闭 – 封闭未占据的膜位点，以防止非特异性抗体结合。

2. 一抗孵育 – 将膜与特异性结合目标蛋白的一抗孵育。

3. 洗涤 – 洗涤膜以去除任何未结合的一抗。

4. 二抗孵育 – 将膜与结合一抗的偶联二抗孵育。

5. 洗涤 – 再次洗涤以去除任何未结合的二抗。

6. 检测 – 将膜与可与偶联二抗反应的底物孵育，从而揭示目标蛋白的位置。

Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜选择指南

下表列出了适用于特定蛋白质印迹后应用的膜选择。由于蛋白质的特性（例如电荷密度、构象和疏水性）存在差异，并非所有蛋白质在膜表面的表现都相同。您可能需要使用不同的Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜进行实验，以优化特定应用的结果。

应用	膜选择
通用免疫分析	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜（0.45 μm）
氨基酸分析	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜（0.45 μm）
低丰度或小分子量蛋白质的免疫分析	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜（0.22 μm）
低丰度或小分子量蛋白质的测序	Ublot™ 硝酸纤维素（NC）印迹膜（0.22 μm）