【Ucallm】Ublot™ PVDF印迹膜产品说明
Ublot™ PVDF印迹膜

产品信息
货号 |
产品名称 |
产品孔径 |
产品尺寸 |
W3F21 |
Ublot™ PVDF印迹膜 |
0.2 μm |
30 cm×1m |
W3F23 |
Ublot™ PVDF印迹膜 |
0.2 μm |
30 cm×3m |
W3F41 |
Ublot™ PVDF印迹膜 |
0.45 μm |
30 cm×1m |
W3F43 |
Ublot™ PVDF印迹膜 |
0.45 μm |
30 cm×3m |
产品简介
Ublot™ PVDF印迹膜是一种聚偏氟乙烯 (PVDF) 微孔膜,用于从各种凝胶基质中转移蛋白质。与硝酸纤维素膜相比,它具有更佳的操作性能。
这款疏水膜有两种孔径:0.45μm 和 0.22μm,使其能够结合各种分子量范围的蛋白质:
0.45μm孔径:适用于大多数蛋白质,提供更高的检测灵敏度。
0.22μm孔径:适用于分子量小于20,000的蛋白质,确保更好地吸附和保留小分子蛋白质。
Ublot™ PVDF印迹膜具有出色的蛋白质保留性、高物理强度和广泛的化学相容性,使其成为免疫测定的最佳选择。
蛋白质印迹的常用方法和免疫检测
推荐转印操作步骤(半干转印为例)
1. 用SDS PAGE凝胶分离蛋白质样品和蛋白Marker。
2. 小心地裁切和放置凝胶,并将凝胶在冷转移缓冲液中平衡5~20分钟。
3. 将膜和滤纸切成适合凝胶的尺寸。将PVDF膜在甲醇中预湿20秒,直至其从不透明的白色变为均匀的半透明灰色,然后浸泡在超纯水中1-2分钟,去除试剂残留;随后在冷转移缓冲液中平衡2-3分钟,直至可以使用。
使用提醒:
膜润湿后,请勿使其变干。如果膜部分变干(变成不透明的白色),也必须重新润湿。
4. 依次组装转印装置,转印夹子→海绵垫→滤纸→预湿的膜→裁切好并预湿的凝胶→滤纸→海绵垫→转印夹子,每放置一层要注意避免起皱、折叠或存在气泡(可利用切胶板等工具轻轻赶压气泡,使每层紧密贴合)
5. 按照所用转印装置说明设置运行条件等,开始转印。
6. 转印结束后,取出印迹膜,并在超纯水中短暂冲洗去除凝胶碎屑。印迹膜可以风干储存,也可以立即使用用于免疫检测步骤。
免疫检测
成功进行蛋白质印迹实验的一些关键因素,例如蛋白质浓度、封闭液和抗体浓度,可能需要在以下方案中进行优化。
标准免疫检测
1. 如果印迹膜已干,请将其重新浸湿,浸泡在甲醇中 15 秒,或直至其颜色从不透明的白色变为半透明的灰色。
2. 用超纯水冲洗印迹膜 1 分钟。
3. 将印迹膜放入封闭缓冲液中,轻轻搅拌孵育 1 小时。
4. 将一抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。
5. 将印迹膜放入稀释的一抗溶液中,室温孵育 1 小时(或 4°C 过夜),轻轻搅拌。
6. 使用洗涤缓冲液(含 Tween®-20 表面活性剂的缓冲液(TBST 或 PBST))洗涤印迹膜 3-5 次,每次 5 分钟。
7. 将二抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。
8. 将印迹膜放入稀释的酶标记二抗溶液中,室温孵育1小时。
9. 用洗涤缓冲液洗涤印迹膜3-5次,每次5分钟。
10. 将印迹膜放入干净的容器中,并加入相应的检测试剂。
11. 按照检测所用试剂说明书操作,孵育1-5分钟。
(1) 对于HRP或AP化学发光试剂,将印迹膜暴露于X光胶片或使用成像系统获取数字图像。
(2)对于显色检测,加入试剂并等待信号出现。
更多产品信息
Ublot™ PVDF印迹膜性能及应用
成分 |
PVDF |
孔径 |
0.22μm、0.45μm |
亲疏水性 |
疏水性 |
蛋白结合能力 |
0.22μm:>260 μg/cm2(BSA) |
0.45μm:>180μg/cm2(BSA) | |
应用 |
结合分析 |
斑点印迹 | |
糖蛋白可视化 | |
质谱氨基酸分析 | |
N端蛋白质测序 | |
检测方法 |
化学发光、比色法、放射性 |
实验所需试剂
1. 甲醇
2. 超纯水
3. 转印缓冲液推荐
半干转移:25 mM Tris Base,192 mM Glycine,(pH 8.3,含10-20%醇)
干转移:48 mM Tris,39 mM Glycine,(pH 9.2,含10-20%醇)
4. 封闭缓冲液:商品化快速封闭剂或0.5-5%洗涤缓冲液封闭剂(牛血清白蛋白、酪蛋白或脱脂奶粉)
5. 洗涤缓冲液:含0.05-0.1% TWEEN ® 20的磷酸盐缓冲液(PBS)或Tris缓冲液(TBS)(PBST或TBST)。
PBS成分:10 mM Na2HPO4.12H2O,pH 7.2,0.9% NaCl
TBS成分:10 mM Tris,pH 7.4,0.9% NaCl
Ublot™ PVDF印迹膜使用注意事项
1. 处理膜时务必佩戴手套,以免留下指纹。
2. 使用钝镊子,以免损坏膜。
3. 切割或处理膜时,请保留保护纸(浅蓝色纸),但膜润湿后请丢弃。
4. 小心处理膜,避免刮伤表面,切勿折叠。
5. 疏水性 Ublot™ PVDF 印迹膜必须预先用甲醇溶液润湿。润湿后,膜会从不透明变为半透明。
6. 蛋白质转印后,用超纯水清洗印迹膜以去除残留碎屑。
7. 印迹膜可风干后在 4°C 下保存数月(以备将来使用)或立即使用。
蛋白质转移方法的比较
湿转 |
半干转 |
|
条件 |
膜凝胶层浸入缓冲液中 |
浸渍缓冲液的滤纸 |
缓冲液体积 |
0.5 L 或更多,取决于系统 |
每块微型凝胶约0.05升 |
转移时间 |
慢速(1 小时或更长时间) |
快速(7-45分钟) |
运行 |
恒定压力或流量 |
恒流 |
凝胶平衡时间 |
非必需,但建议使用 |
每块微凝胶至少平衡15分钟 |
典型连续缓冲液名称/成分 |
Towbin 缓冲液,pH 8.3 |
Bjerrum Shafer Nielsen缓冲液,pH 9.2 48 mM Tris,39 mM Glycine |
所需缓冲液系统 |
连续(单缓冲区) |
连续(单缓冲液)或不连续(3 种缓冲液) |
典型非连续缓冲液名称/成分 |
不适用 |
阳极缓冲液 I:300 mM Tris,pH 10.4 |
醇百分比 |
10-20% |
10-20% |
SDS 含量 |
0.0-0.05% |
0.0-0.05% |
转印缓冲液中的醇(甲醇、乙醇或异丙醇)有两个重要作用:稳定凝胶尺寸和去除蛋白质分子上络合的十二烷基硫酸钠 (SDS),从而增强蛋白质与膜的结合。
然而,对于较大的蛋白质或存在溶解性问题的蛋白质,建议降低醇浓度并在转印缓冲液中添加少量 SDS。这种调整可以改善蛋白质从凝胶中的洗脱,同时保持其在转印过程中的溶解性。
免疫测定
免疫测定是一种基于抗体的技术,用于定量检测和鉴定印迹膜中的蛋白质或抗原。该过程包括以下步骤:
1. 封闭未占据的膜位点,以防止非特异性抗体结合。
2. 将膜与可结合目标蛋白的一抗孵育。
3. 清洗以去除任何未结合的一抗。
4. 将膜与可结合一抗的偶联二抗孵育。
5. 清洗以去除任何未结合的二抗。
6. 将膜与可与偶联二抗反应的底物孵育,从而揭示目标蛋白的位置。
Ublot™ PVDF 转印膜选择指南
下表提供了针对特定蛋白质印迹应用的建议。由于蛋白质的特性(例如电荷密度、构象和疏水性)存在差异,并非所有蛋白质在膜表面的表现都相同。因此,您可能需要使用不同的Ublot™ PVDF 转印膜进行实验,以优化您特定应用的结果。
应用 |
膜选择 |
通用免疫分析 |
Ublot™ PVDF印迹膜(0.45μm) |
氨基酸分析 |
Ublot™ PVDF印迹膜(0.45μm) |
低丰度或小分子量蛋白质的免疫分析 |
Ublot™ PVDF印迹膜( 0.22μm) |
低丰度或小分子量蛋白质的测序 |
Ublot™ PVDF印迹膜( 0.22μm) |
END
往期推荐
Western Blot(WB)实验
联系我们

点击阅读原文 获取更多
或在公众号后台回复关键词:“Ublot™ PVDF膜”获取PDF