【Ucallm】Ublot™ PVDF印迹膜产品说明

【Ucallm】Ublot™ PVDF印迹膜产品说明

Ublot™  PVDF印迹膜


产品信息

货号

产品名称

产品孔径

产品尺寸

W3F21

Ublot™  PVDF印迹膜

0.2 μm

30 cm×1m

W3F23

Ublot™  PVDF印迹膜

0.2 μm

30 cm×3m

W3F41

Ublot™  PVDF印迹膜

0.45 μm

30 cm×1m

W3F43

Ublot™  PVDF印迹膜

0.45 μm

30 cm×3m

产品简介

Ublot™  PVDF印迹膜是一种聚偏氟乙烯 (PVDF) 微孔膜,用于从各种凝胶基质中转移蛋白质。与硝酸纤维素膜相比,它具有更佳的操作性能。

这款疏水膜有两种孔径:0.45μm 和 0.22μm,使其能够结合各种分子量范围的蛋白质:

  • 0.45μm孔径:适用于大多数蛋白质,提供更高的检测灵敏度。

  • 0.22μm孔径:适用于分子量小于20,000的蛋白质,确保更好地吸附和保留小分子蛋白质。

Ublot™  PVDF印迹膜具有出色的蛋白质保留性、高物理强度和广泛的化学相容性,使其成为免疫测定的最佳选择。

蛋白质印迹的常用方法和免疫检测


推荐转印操作步骤(半干转印为例)

1. 用SDS PAGE凝胶分离蛋白质样品和蛋白Marker。

2. 小心地裁切和放置凝胶,并将凝胶在冷转移缓冲液中平衡5~20分钟。

3. 将膜和滤纸切成适合凝胶的尺寸。将PVDF膜在甲醇中预湿20秒,直至其从不透明的白色变为均匀的半透明灰色,然后浸泡在超纯水中1-2分钟,去除试剂残留;随后在冷转移缓冲液中平衡2-3分钟,直至可以使用。

使用提醒:

膜润湿后,请勿使其变干。如果膜部分变干(变成不透明的白色),也必须重新润湿。

4. 依次组装转印装置,转印夹子→海绵垫→滤纸→预湿的膜→裁切好并预湿的凝胶→滤纸→海绵垫→转印夹子,每放置一层要注意避免起皱、折叠或存在气泡(可利用切胶板等工具轻轻赶压气泡,使每层紧密贴合)

5. 按照所用转印装置说明设置运行条件等,开始转印。

6. 转印结束后,取出印迹膜,并在超纯水中短暂冲洗去除凝胶碎屑。印迹膜可以风干储存,也可以立即使用用于免疫检测步骤。

免疫检测

成功进行蛋白质印迹实验的一些关键因素,例如蛋白质浓度、封闭液和抗体浓度,可能需要在以下方案中进行优化。

标准免疫检测

1. 如果印迹膜已干,请将其重新浸湿,浸泡在甲醇中 15 秒,或直至其颜色从不透明的白色变为半透明的灰色。

2. 用超纯水冲洗印迹膜 1 分钟。

3. 将印迹膜放入封闭缓冲液中,轻轻搅拌孵育 1 小时。

4. 将一抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

5. 将印迹膜放入稀释的一抗溶液中,室温孵育 1 小时(或 4°C 过夜),轻轻搅拌。

6. 使用洗涤缓冲液(含 Tween®-20 表面活性剂的缓冲液(TBST 或 PBST))洗涤印迹膜 3-5 次,每次 5 分钟。

7. 将二抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

8. 将印迹膜放入稀释的酶标记二抗溶液中,室温孵育1小时。

9. 用洗涤缓冲液洗涤印迹膜3-5次,每次5分钟。

10. 将印迹膜放入干净的容器中,并加入相应的检测试剂。

11. 按照检测所用试剂说明书操作,孵育1-5分钟。

(1) 对于HRP或AP化学发光试剂,将印迹膜暴露于X光胶片或使用成像系统获取数字图像。

(2)对于显色检测,加入试剂并等待信号出现。

更多产品信息


Ublot™  PVDF印迹膜性能及应用

成分

PVDF

孔径

0.22μm0.45μm

亲疏水性

疏水性

蛋白结合能力

0.22μm:>260 μg/cm2(BSA)

0.45μm:>180μg/cm2(BSA)

应用

结合分析

斑点印迹

糖蛋白可视化

质谱氨基酸分析

N端蛋白质测序

检测方法

化学发光、比色法、放射性

实验所需试剂

1. 甲醇

2. 超纯水

3. 转印缓冲液推荐

  • 半干转移:25 mM Tris Base,192 mM Glycine,(pH 8.3,含10-20%醇)

  • 干转移:48 mM Tris,39 mM Glycine,(pH 9.2,含10-20%醇)

4. 封闭缓冲液:商品化快速封闭剂或0.5-5%洗涤缓冲液封闭剂(牛血清白蛋白、酪蛋白或脱脂奶粉)

5. 洗涤缓冲液:含0.05-0.1% TWEEN ® 20的磷酸盐缓冲液(PBS)或Tris缓冲液(TBS)(PBST或TBST)。

  • PBS成分:10 mM Na2HPO4.12H2O,pH 7.2,0.9% NaCl

  • TBS成分:10 mM Tris,pH 7.4,0.9% NaCl

Ublot™  PVDF印迹膜使用注意事项

1. 处理膜时务必佩戴手套,以免留下指纹。

2. 使用钝镊子,以免损坏膜。

3. 切割或处理膜时,请保留保护纸(浅蓝色纸),但膜润湿后请丢弃。

4. 小心处理膜,避免刮伤表面,切勿折叠。

5. 疏水性 Ublot™ PVDF 印迹膜必须预先用甲醇溶液润湿。润湿后,膜会从不透明变为半透明。

6. 蛋白质转印后,用超纯水清洗印迹膜以去除残留碎屑。

7. 印迹膜可风干后在 4°C 下保存数月(以备将来使用)或立即使用。

蛋白质转移方法的比较



_

湿转

半干转

条件

膜凝胶层浸入缓冲液中

浸渍缓冲液的滤纸

缓冲液体积

0.5 L 或更多,取决于系统

每块微型凝胶约0.05

转移时间

慢速(1 小时或更长时间)

快速(7-45分钟)

运行

恒定压力或流量

恒流

凝胶平衡时间

非必需,但建议使用

每块微凝胶至少平衡15分钟

典型连续缓冲液名称/成分

Towbin 缓冲液,pH 8.3
25 mM Tris
192 mM Glycine

Bjerrum Shafer Nielsen缓冲液,pH 9.2

48 mM Tris39 mM Glycine

所需缓冲液系统

连续(单缓冲区)

连续(单缓冲液)或不连续(3 种缓冲液)

典型非连续缓冲液名称/成分

不适用

阳极缓冲液 I:300 mM Tris,pH 10.4
阳极缓冲液 II:25 mM Tris,pH 10.4
阴极缓冲液:25 mM Tris
40 mM 氨基己酸,pH 9.4

醇百分比

10-20%

10-20%

SDS 含量

0.0-0.05%

0.0-0.05%


转印缓冲液中的醇(甲醇、乙醇或异丙醇)有两个重要作用:稳定凝胶尺寸和去除蛋白质分子上络合的十二烷基硫酸钠 (SDS),从而增强蛋白质与膜的结合。

然而,对于较大的蛋白质或存在溶解性问题的蛋白质,建议降低醇浓度并在转印缓冲液中添加少量 SDS。这种调整可以改善蛋白质从凝胶中的洗脱,同时保持其在转印过程中的溶解性。

免疫测定


免疫测定是一种基于抗体的技术,用于定量检测和鉴定印迹膜中的蛋白质或抗原。该过程包括以下步骤:

1. 封闭未占据的膜位点,以防止非特异性抗体结合。

2. 将膜与可结合目标蛋白的一抗孵育。

3. 清洗以去除任何未结合的一抗。

4. 将膜与可结合一抗的偶联二抗孵育。

5. 清洗以去除任何未结合的二抗。

6. 将膜与可与偶联二抗反应的底物孵育,从而揭示目标蛋白的位置。

Ublot™ PVDF 转印膜选择指南


下表提供了针对特定蛋白质印迹应用的建议。由于蛋白质的特性(例如电荷密度、构象和疏水性)存在差异,并非所有蛋白质在膜表面的表现都相同。因此,您可能需要使用不同的Ublot™ PVDF 转印膜进行实验,以优化您特定应用的结果。


应用

膜选择

通用免疫分析

Ublot™  PVDF印迹膜(0.45μm)

氨基酸分析

Ublot™  PVDF印迹膜(0.45μm)

低丰度或小分子量蛋白质的免疫分析

Ublot™  PVDF印迹膜( 0.22μm)

低丰度或小分子量蛋白质的测序

Ublot™  PVDF印迹膜( 0.22μm)

END

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Western Blot(WB)实验

1.样本制备

9.显影检测

2.蛋白定量


8.抗体洗脱

(膜再生)

3.制胶

7.抗体孵育

4.电泳

5.转膜

6.封闭

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