【Promega】HaloTag® Technology
HaloTag® Technology
说明
HaloTag® Technology (HaloTag® 技术 ) 是能在体内和体外实现共价标记和固定蛋白的一种技术平台。该技术是以独特设计的报告蛋白与其特异配基之间形成高效的共价键为基础，帮助研究者在生化和细胞环境中研究蛋白的功能。报告蛋白由 HaloTag® 载体编码，这种共价结合可以发生在活细胞内、溶液内，或在固相支持物上。
关于 HaloTag® Protein Purification Systems 的更多信息，请访问 HaloTag® Protein Purification Systems 的在线目录页面。
用于蛋白固定的 HaloTag® 配基
HaloLink™ Resin (HaloLink™ 树脂，Cat.# G1911) 是一个固相支持物，能够将 HaloTag® 融合蛋白以共价结合的方式定向地粘附到Sepharose® 表面。由于是共价连接，HaloTag® 融合蛋白不能从树脂上洗脱，这样就可以进行充分的洗涤，以除去非特异结合的蛋白，而不存在将 HaloTag® 融合蛋白洗脱掉的危险。结合的速度非常快，与生物素 - 链霉亲和素相当。
HaloLink™ Magnetic Beads (HaloLink™ 磁珠，Cat.# G9311) 提供快速可靠的方法，将 HaloTag® 融合蛋白共价捕获和固定到顺磁性颗粒上。通过 HaloTag® 配基进行的融合蛋白固定是均衡一致的，定向到磁性颗粒表面。
用于细胞成像的 HaloTag® 荧光配基
( 关于 HaloTag® 荧光配基的更多信息，请查看 HaloTag® 技术：聚焦成像技术手册 #TM260)
• 可穿透细胞的荧光配基 ( 快速标记操作方法 )：
HaloTag® TMR Ligand (555Ex/585Em), Cat.# G8251。
HaloTag® Oregon Green® Ligand (496Ex/516Em), Cat.# G2801。
HaloTag® diAcFAM Ligand (494Ex/526Em), Cat.# G8272。
HaloTag® Coumarin Ligand (353Ex/434Em), Cat.# G8581。
• 用于细胞表面标记的不可穿透细胞的荧光配基 ( 快速标记操作方法 )：
HaloTag® Alexa Fluor® 488 Ligand (494Ex/517Em),Cat.# G1001。
• 可穿透细胞的荧光配基 (“无冲洗”操作方法 )：
HaloTag® TMRDirect™ Ligand (555Ex/585Em), Cat.# G2991。
HaloTag® R110Direct™ Ligand (502Ex/527Em), Cat.# G3221。
用于蛋白检测的 HaloTag® 配基
HaloTag® Biotin Ligand (HaloTag® 生物素配基，Cat.# G8281)含有 12 个原子的生物素连接臂，由于生物素 - 链霉亲和素具有高亲和力，可作为亲和标签用于捕获 HaloTag® 蛋白。
HaloTag® PEG-Biotin Ligand (HaloTag® PEG- 生物素配基，Cat.# G8591) 含有 HaloTag® 生物素配基中所缺少的间隔基团，这为链霉亲和素和 HaloTag® 蛋白之间提供了更长、更灵活的连接部位，从而在将 HaloTag® 融合伴侣蛋白进行固定和衍生化的时候，有助于保护其活性。
关于 HaloLink™ Protein Array Systems 的更多信息，请访问HaloLink™ Protein Array Systems 的在线目录页面。
关于 HaloCHIP™ System 的更多信息，请访问 HaloCHIP™System 的在线目录页面。
HaloTag® 载体
HaloTag® 载体包含大小为 33kDa 的单体 HaloTag® 蛋白的开放阅读框 (ORF)，是一种水解酶基因的基因工程衍生物。对于哺乳动物细胞来说，HaloTag® 蛋白无内源性表达，使得其标记具有高特异性。
HaloTag® Flexi® 载体
有多种适用于哺乳动物、大肠杆菌和无细胞蛋白表达的HaloTag® Flexi 载体可供选择，并且与 Flexi® 载体系统兼容。因此，可轻易地将编码蛋白的序列转入到 Flexi® 载体中，Flexi® 载体含有多种表达标签或肽标签以满足下游应用。
• 用于哺乳动物蛋白表达的 HaloTag ® Flexi ® 载体：
pFC14、pFC15、pFC16 和 pFC17 HaloTag® CMV Flexi® 载体主要用于在哺乳动物细胞中表达 C 末端 HaloTag® 融合蛋白。
• 用于大肠杆菌蛋白表达的 HaloTag ® Flexi ® 载体
pFN18 HaloTag® T7 Flexi® 载体主要用于在大肠杆菌中表达 N末端 HaloTag® 融合蛋白。
• 用于无细胞蛋白表达的 HaloTag ® Flexi ® 载体：
pFN19 HaloTag® T7 SP6 Flexi® 载体主要用于在无细胞翻译系统中表达 N 末端 HaloTag® 融合蛋白。pFC20 HaloTag®T7 SP6 Flexi® 载体主要用于在无细胞翻译系统中表达 C 末端HaloTag® 融合蛋白。
关于 HaloTag® Flexi 载体的更多信息，请访问 HaloTag® Flexi载体在线目录页面。
注意：pHT2 载体(Cat.# G8241) 已停产，不适合细菌系统的蛋白表达。
HaloTag® Flexi® 载体中的 HaloTag® 蛋白与已停产的 pHT2 载体中的 HaloTag® 蛋白的差异比较
HaloTag® Flexi® 载体中的 HaloTag® 蛋白是 HaloTag® 7，HaloTag® 7 在温度和变性剂方面具有更强的稳定性、更快的标记速度，因而与 pHT2 HaloTag® 载体所含的 HaloTag® 2 蛋白相比，蛋白表达得到了显著的改善。
HaloTag® 克隆启动系统
HaloTag® 克隆启动系统包括 C8641，Flexi® System，Entry/Transfer；A9280, Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System；R1901, Carboxy Flexi® Enzyme Blend；以及 G3780, HaloTag® Flexi® Vectors-CMV Deletion Series Sample Pack。
关于 HaloTag® Ligand Building Blocks 的信息，请访问 HaloTag® Ligand Building Blocks 的在线目录页面。
HaloTag® 多克隆抗体
Anti-HaloTag® pAb (Cat.# G9281) 是 HaloTag® 报告基因蛋白的多克隆抗体，为通过传统的 Western blotting 或者 ICC 原位标记检测HaloTag® 融合蛋白提供了另一种工具。该多抗可作为一种独立的方法，来检测 HaloTag® 融合蛋白，或者用于对体内 HaloTag® 配基的特异性标记进行确认。
特点
• 在液相或固体支持物上标记：HaloTag® 配基与 HaloTag® 蛋白或融合蛋白以高特异性及亲和力结合。
• 在活细胞中标记 HaloTag® 蛋白：HaloTag® TMR、diAcFAM、香豆素 (Coumarin) 和生物素配基可穿透细胞膜。
• Pull Down 蛋白复合物：HaloTag® PEG-Biotin Ligand
(HaloTag® PEG- 生物素配基 ) 上的间隔基团和反应连接臂具有理想的 Pull Down 能力。或者，可以直接用 HaloLink™ 树脂进行 PullDown。
• 使固定细胞成像：共价键十分稳定，可以使固定细胞成像， 并可在严苛的条件下分析标记蛋白。
• 引进新功能或实现依次标记：此技术的开放式结构能实现针对多种应用使用不同的配基。
• 仅需设计一种载体，即可应用于多种实验：通过使用不同的HaloTag® 配基能获得新的功能，而无需设计和克隆新的表达结构。
• 能使用 SDS-PAGE、质谱等技术分析已标记的融合蛋白：结合的配基在变性环境中依然稳定。
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