【Promega】pmirGLO Dual-Luciferase 和Chroma-Luc™ Vectors
pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector
说明
pmirGLO Vector 被设计用于定量评估 miRNA 的活性，这是通过将 miRNA 的靶序列插入到萤火虫萤光素酶基因 (luc2) 的下游或者 3' 端实现的。萤火虫萤光素酶作为主要报告基因，其表达减少意味着内源性的或外源引入的 miRNA 与克隆的 miRNA 的靶序列发生了结合。这一载体是基于 Promega 的双报告基因技术，萤火虫萤光素酶基因 (luc2) 作为主报告基因，用于监控 mRNA 的调节，海肾萤光素酶基因 (hRluc-neo) 作为对照报告基因，用于进行归一化处理和阳性筛选。
特点
• 检测 miRNA 和 miRNA 结合位点的功能。
• Luc2 萤光素酶基因能够达到最高表达量。
• 联合使用海肾萤光素酶 / 新霉素基因作为标志物，既能够使用Dual-Luciferase® 检测试剂盒进行归一化处理，又能够筛选稳定转染的细胞系，两个功能仅需一个载体即可实现。
• 中等强度的 PGK 启动子能够进行敏感度高的分析，而强启动子是无法实现的。
• 储存条件：储存于 -20℃。
Chroma-Luc™ Vectors
说明
Chroma-Glo™ Luciferase Assay System (Chroma-Glo™ 萤光素酶检测系统 ) 和 Chroma-Luc™ Vectors 能用于在样品中加入单一试剂产生红色和绿色 (dual-color，双色 ) 萤光。Chroma-Luc™ 载体由 6 个质粒构成，含有一个合成的红色叩头虫萤光素酶基因，或者两个绿色叩头虫萤光素酶基因中的一个。CBRluc 含有发红光的萤光素酶基因，而 CBG68luc 和 CBG99luc 含有发绿光的萤光素酶基因。Chroma-Luc™ 萤光素酶产生的双色萤光用滤光法测量，既可对每个报告蛋白单独测量，也可以几乎同时测量。除了他们的萤光颜色不同之外，这三种 Chroma-Luc™ 基因还有以下不同：CBG99luc 和CBRluc 具有 99% 的 DNA 和 98% 的蛋白质相似性，是用于瞬时表达检测的理想选择；CBG68luc 和CBRluc 具有68.9%的DNA相似性，然而蛋白质相似性确很高 (>98%)，它们用于稳定表达检测是最好的。
这些基因中的每一个都具有基本载体构造如多克隆位点 (MCS)，同时还有含 SV40 启动子和增强子的对照载体。Chroma-Glo™ 检测系统是一种均质检测系统，每一种 Chroma-Luc™ 萤光素酶产生的萤光的半衰期 >30 分钟，因此无需样品预处理就能对多个板进行操作。从同一孔中进行两种报告基因检测，是高效、可重复的高通量筛选方法。
特点
• 加入一种底物产生两种报告基因信号：通过数据归一化提高精确度和准确度，或使用两个报告基因进行叠加实验检测。用滤光片在光谱上分开不同的萤光信号。
• 建立理想的对照或叠加系统：使用高度同源的红色和绿色萤光素酶来减少可能的 RNA 和蛋白质对报告基因表达的影响。
• 灵活：使用基本载体克隆目的调控元件，或者使用对照载体作为内对照。
• 在最少的反常转录行为基础上实现高表达：使用合成的基因设计以更容易可靠地获得结果。
储存条件：储存于 -20℃。
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