【Promega】ApoTox-Glo™ 三重检测试剂盒和 ApoLiveGlo™ 多重检测试剂盒
ApoTox-Glo™ Triplex Assay
实验室用。仅用于体外研究。Cat.# G6320 提供了足够的试剂：在 96 孔板模式下，可检测100 个孔；在 384 孔板模式下，可检测 400 个孔。Cat.# G6321 提供了足够的试剂：在 96孔板模式下，可检测 500 个孔；在 384 孔板模式下，可检测 2,000 个孔。
说明
ApoTox-Glo™ Triplex Assay(ApoTox-Glo™ 三重检测试剂盒 )结合了三种检测试剂，能够轻松实现对同一孔细胞的活力、毒性和凋亡事件的评估。首先，细胞活力和细胞毒性的确定是通过同时检测两种不同的蛋白酶来实现的，实验时需要加入含有两种肽底物的试剂，该试剂本身不会导致细胞裂解。活细胞蛋白酶活性只能够从完整的活细胞中检测到，检测时所使用的是能够产生荧光的、可渗透进入细胞的多肽底物 (GF-AFC)。该底物进入胞膜完整的细胞后，被剪切而生成荧光信号，信号强度与活细胞数目成正比。当细胞膜完整性缺失，细胞内容物渗漏到周围培养基时，活细胞相关的蛋白酶即失活。死细胞的检测是通过同时加入第二种底物——不能穿透细胞膜的荧光肽底物 (bis-AAF-R110) 而进行的，该底物可以检测死细胞蛋白酶的活性，因为死细胞失去了细胞膜完整性，将蛋白酶从细胞中释放出来。这就实现了细胞活力和细胞毒性的检测，两种结果是呈负相关的。接着加入第二种试剂，它含有针对 caspase-3/7 的发光 DEVD- 肽底物，以及 Ultra-Glo™ Recombinant Thermostable Luciferase(Ultra-Glo™ 重组热稳定萤光素酶 )。底物被 caspase-3/7 剪切后释放出萤光素，它是萤光素酶的底物，能够在萤光素酶反应中产生光。使用发光检测仪可以检测产生的光，光的生成与与凋亡的关键指标——caspase-3/7的活性相关。
特点
• 在同一个样品孔中检测活力、细胞毒性和凋亡：在同一个样品孔中确定细胞死亡的机理。
• 使用简单：检测过程只需进行“加样 - 混合 - 检测”。
• 自带对照参数，用于数据的归一化处理：活细胞数 / 死细胞数的比率与细胞总数无关，可以用于归一化数据。
• 灵活且便于自动化：每一种检测组分的体积都可调整大小，以满足通量要求，也便于在 96 孔和 384 孔板上的自动化操作。
• 提高效率，节省预算：通过在同一个孔中实现三种检测，减少了细胞培养成本和劳动力成本。
• 储存条件：将所有组分避光储存于 -20℃。
ApoLive-Glo™ Multiplex Assay
说明
在同一反应孔内， ApoLive-Glo™ Multiplex Assay (ApoLiveGlo™ 多重检测试剂盒 ) 既能检测以存活细胞数量作为标志的细胞毒性，又能检测以 caspase 活性为标志的细胞凋亡。该试剂盒的第一部分检测标志细胞活力的活细胞蛋白酶的活性。活细胞蛋白酶活性仅存在于完整活细胞中，可利用能够产生荧光、可渗透进入细胞的多肽底物 ( 甘氨 - 酰苯丙 - 氨基荧光香豆素；GF-AFC) 进行检测。
该底物进入胞膜完整的细胞后，随即被活细胞蛋白酶剪切，并产生荧光信号，信号强度与活细胞数量成正比。一旦细胞膜丧失完整性并渗漏至周围培养基，活细胞蛋白酶也立即失活。该试剂盒的第二部分采用 Caspase-Glo® 检测技术来检测 caspase 的活化，caspase是细胞凋亡的关键生物标志物。Caspase-Glo® 试剂盒提供能发光的 caspase-3/7 底物，该底物含有四肽序列 DEVD，试剂盒中的试剂针对 caspase 活性、萤光素酶活性及细胞裂解作了优化。加入Caspase-Glo® 3/7 试剂将导致细胞裂解，随后 caspase 剪切底物并产生“辉光型”萤光信号。萤光强度与存在的 caspase 活性成正比。
特点
• 在同一样品孔中共同检测细胞活力和细胞凋亡：准确确定细胞死亡机制，耗时少、样品消耗少。
• 易于操作：该检测只需简单地按“加样 - 混合 - 检测”的顺序进行。
• 以细胞活力为对照，对 caspase 数据进行归一化处理：caspase 活性与活细胞的比率可用于确定 caspase 的活化程度，有利于细胞数量的归一化。
• 应用灵活，便于自动化：每个检测组分的体积是可扩展的，以适应不同的通量需求，该试剂盒适用于96及384孔板的自动化检测。
• caspase 活性窗口缺失情况下，亦能检测到细胞死亡。
• 与其它试剂盒进行叠加检测：检测的第一步不需要裂解细胞，可与处于不同检测波长的荧光检测试剂盒叠加。
• 储存条件：所有组分避光储存于 -20℃。
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