【Promega】GeneClip™ U1 发夹克隆系统和T7 RiboMAX™ Express RNA 干扰系统

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GeneClip™ U1 Hairpin Cloning Systems

说明

GeneClip™ U1 Hairpin Cloning Systems(GeneClip™ U1 发夹克隆系统 ) 由线性质粒组成，这些质粒是为了在人类细胞中快速、简便地克隆人类目的序列，来表达短发夹 RNAs(shRNAs) 而设计的。

转染至人类细胞中后，从包含 U1 RNA 聚合酶启动子和 siRNA 模板的 DNA 质粒可有效地进行短干扰 RNAs(siRNAs) 的体内表达。U1启动子通常用于体外成功地产生发夹 siRNAs。

为使发夹 siRNA 插入 pGeneClip™ 载体，将 2 个短 DNA 寡核苷酸退火，形成包含该发夹 siRNA 的目的序列的 DNA 插入物。退火后，寡核苷酸形成与 pGeneClip™ Vector 末端匹配的突出末端，便于粘性末端连接。一经转染，RNA 聚合酶 II 即在体内转录发夹插入序列，生成发夹 siRNAs。

siRNATarget Designer 程序 (www.promega.com/siRNADesigner/)可用来为使用 Promega RNA 干扰系统设计寡核苷酸序列。该程序对输入的 DNA 或 RNA 序列设计符合 siRNA 要求的区域进行分析。能够沉默这些序列的 siRNAs 将会与选定的试剂盒所要求的寡核苷酸序列一同显示出来。

特点

• 更多载体选择：这些系统提供的载体含有各种用于稳定转染真核细胞的抗生素抗性选择标记物，或用于确定转染效率的hMGFP。

• 节省时间：载体以预消化的形式提供以减少载体制备的时间。

• 便利：每个系统都包含 T4 DNA 连接酶 , 2X 快速连接缓冲液 , 寡核苷酸退火缓冲液和 pGeneClip™ 载体。

• 轻松鉴定目的克隆：使用 PstI 酶切快速鉴定阳性重组体。

• 储存条件：储存于 -20℃。

T7 RiboMAX™ Express RNAi System

说明

T7 RiboMAX™ Express RNAi System (T7 RiboMAX™ Express RNA 干扰系统 ) 是一种体外转录系统，为短时间内产生毫克级的双链 RNA(dsRNA) 而设计。产生的 dsRNA 中不含蛋白和其它成分的污染，适合于哺乳动物和非哺乳动物系统的RNA干扰(RNAi)研究。

T7 RiboMAX™ Express RNAi System 可用于合成哺乳动物系统实验中的 21bp 的短干扰 RNAs(siRNAs)。体外合成的 siRNAs 已被证明能够与化学合成的 siRNAs 一样有效，均可在哺乳动物细胞中诱导 RNA 干扰。

此外 , T7 RiboMAX™ Express RNAi System 还可合成将近200bp 或更长的 dsRNA 分子，可被应用于非哺乳动物系统。两条互补的 RNA 链是以 DNA 为模板来合成的 ( 模板可以是质粒或 PCR 产物 )。产生的 RNA 链在转录反应后退火形成 dsRNA。反应中残存的单链 RNA 和 DNA 模板会以核酸酶消化去除。然后以异丙醇沉淀来纯化 dsRNA ，得到的 dsRNA 可被用于选择进行 RNAi 实验的生物体。

特点

• 节省时间：T7 RiboMAX™ Express RNAi System 可在 30 分钟内产生毫克级 RNA。

• 将移液的误差减至最低：4 种 rNTPs 和 2X 转录缓冲液已经混合，将移液误差和组装反应组分的时间减到最小。

• 储存条件：初次解冻后，除 RNase A 外的组分应储存于 22-25℃，所有其它组分储存于 -20℃。

化学合成的 siRNAs 与体外转录合成的 siRNAs 诱导的 RNA 干扰的比较。两个不同的萤光素酶靶序列分别由 T7 RiboMAX™ Express RNAi System (IVT #1 和 #2) 体外转录合成和化学合成 (Syn #1 和 #2)。使用 CodeBreaker™ Transfection Reagent 转染后，这些siRNAs被用于评估稳定表达海肾萤光素酶的CHO细胞内的RNA干扰效应。