【Promega】E. coli S30 Extract for Circular DNA
【Promega】E. coli S30 Extract for Circular DNA
描述
E. coli S30 Extract for Circular DNA ( 用于环状 DNA 模板的 E. coli S30 提取物系统 ) 简化了在质粒或 λ 载体中克隆的 DNA 序列的转录和翻译，提供了鉴定和研究多肽特征的有力工具。研究者只需准备含有合适的原核启动子和核糖体结合位点的克隆 DNA即可。这种提取物的制备采用并改进了 Zubay 描述的方法，是从 OmpT 内蛋白酶和 lon 蛋白酶活性缺失的大肠杆菌 B 株制得。
从而极大地增强了表达蛋白的稳定性，因为若在体内翻译的话，表达的目标蛋白将会被蛋白酶降解。由于宿主编码的抑制物的存在，某些蛋白在体内表达的水平很低，使用 S30 体外系统可提高这些蛋白的翻译水平。
反应原理
S30 System for Circular DNA 包含针对每批 S30 提取物优化的无氨基酸的 S30 预混物，也包括所有其他需要的组分，有rNTPs、tRNAs、ATP 再生系统、IPTG 和适当的盐。提供缺乏半胱氨酸、蛋氨酸或亮氨酸的氨基酸混合物以促进翻译产物的放射性标记。该系统还包括对照 DNA 模板，pBESTluc™ 载体，包含位于tac 启动子下游的真核萤火虫萤光素酶基因和一个核糖体结合位点。使用提供的萤光素酶检测试剂（Luciferase Assay Reagent），可以通过非放射性方法很容易地检测 S30 System for Circular DNA 中萤光素酶基因的表达。该测定产生几分钟的高亮输出，使研究人员能够从几种检测方法中进行选择，包括简单的发光视觉观察。
特点
• 减少表达降解蛋白的机会。
• 包括偶联转录 / 翻译所需的所有组分。
• 产生极低水平的内源性蛋白质，因此背景较低。
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