【Promega】三元复合物的形成
PROTAC 可介导靶蛋白与 E3 连接酶复合物间的连接，即形成三元复合物，该过程是实现靶蛋白降解的一个基本步骤。
NanoBRET™ Target PPI 技术可实现对活细胞中蛋白质间相互作用（PPI）（即其结合和解离）的可靠研究。就是说，可将靶蛋白（T）：NanoLuc® 融合，E3 连接酶：HaloTag® 融合，并将二者共同进行异位表达。三元复合物的成功形成可拉近萤光素酶（供体）与可渗透细胞荧光 NanoBRET™ 618 HaloTag® 配体标记的 HaloTag-E3 连接酶（受体）的距离，进而触发生物发光共振能量转移（BRET）。因此，该类复合物发生结合和解离时，可导致 BRET 相应增加或减少。本检测也可使用内源性标记的靶蛋白 - 供体融合进行。
▍▏检测工作流程
▍▏三元复合物形成的实时监测
分别使用 PROTACs MZ-1（1 μM）或 dBET6（0.1 μM）进行相关处理后，测定内源性标记的 HiBiT-BRD4 与异位
表达的 HaloTag®-VHL（图 A）和 HaloTag®-CRBN（图 B）之间三元复合物的形成情况。使用 NanoBRET™ KineticDetection System 记录 6 小时内的相关数据。
▍▏产品包装内容
NanoBRET™ CRBN Ternary Complex Starter Kit
HaloTag®-CRBN Fusion Vector
HaloTag®-CRBN HEK293 Cell Line
NanoBRET™ VHL Ternary Complex Starter Kit
HaloTag®-VHL Fusion Vector
HaloTag®-VHL HEK293 Cell Line
HaloTag® Control Vector (Negative Control)
NanoLuc®-BRD4 FL Fusion Vector (Positive Control)
▍▏检测试剂
• NanoBRET™ Nano-Glo® Detection System (0 – 2 h)
• NanoBRET™ Nano-Glo® Kinetic Detection System (2 – 24 h)
▍▏产品列表
NanoBRET™ 三元复合物检测
如目标是激酶、BET 家族或 HDAC 蛋白，请参见promega提供的多种预克隆 NanoLuc 融合载体。
NanoBRET™ Ubiquitination Assay
针对不同可用靶点(如 β- 连环蛋白、c-Myc)即用型检测试剂，请咨询 Promega。
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