【Promega】GloSensor™ cAMP Assay

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GloSensor™ cAMP Assay promega E1261 E2301 E1171 E1290 E1291

说明

GloSensor™ cAMP Assay 采用了一种全新的方法来检测活细胞内 cAMP 的水平。cAMP 是参与 GPCR 信号转导的一种重要的二级信使，通过 Gα-s 和 Gα-i 蛋白产生作用。这个新的试剂盒基于GloSensor^TM 技术，该技术将萤火虫萤光素酶经过遗传改造，插入了一个结合 cAMP 的蛋白组分。当结合上 cAMP 后，萤光素酶构象发生改变，导致光输出的增加。这种活细胞检测在利用 cAMP 进行信号转导动力学和调控等研究方面表现出众。

将目的受体和该生物传感器在选定的细胞系中进行瞬时表达时，研究者可使用 GloSensor™ cAMP 检测试剂盒进行检测。此外，还可以创造出同时被生物传感器和目的受体基因转染的稳定细胞系。操作过程很简单：用 GloSensor™ cAMP Reagent (GloSensor™ cAMP试剂 ) 预平衡细胞大约 2 小时；然后用特定的激动剂 / 拮抗剂或者未知活性的化合物处理细胞，10-30 分钟后检测发光。无需其它加样步骤或者操作过程。大部分带有自动进样器的常用发光检测仪都能检测，比如 GloMax® 系列发光检测仪。GloSensor™ cAMP 试剂要求在 GloSensorTM Limited Use Label License (GloSensorTM 有限使用标签许可证书 ) 指导下使用。

选择合适的质粒

我们提供了生物传感器的两种变体。在多数实验中，我们建议首选 pGloSensor^TM -22F cAMP 质粒。

pGloSensor^TM -22F cAMP 质粒：与 pGloSensor^TM -20F cAMP质粒相比，用该质粒进行体外无细胞表达得到的生物传感器，在cAMP 饱和时活化 EC50 及信噪比得到增强。而在活细胞中，这两种质粒表现出的性能基本类似。

pGloSensor^TM-20F cAMP 质粒：该质粒编码的生物传感器可在37℃下的 HEK293 细胞中表现出良好的性能；而 pGloSensor^TM -22F cAMP 质粒所发出的萤光在生理温度下更难检测。

关于这两种质粒基本性能差异的更深入解释，请参阅 TechnicalManual (#TM076) 的第 3.B 节——GloSensor^TM质粒的选择建议。

注意：如有基于 GloSensor^TM技术的定制检测方案开发服务需求，请联系 Promega 公司。

请访问：www.promega.com/glosensor/ 获取更多信息。

特点

• 同类产品中性能最佳：高 Z' 值及高信号；背景比值非常适用于HTS/uHTS；高达 1,000 倍的光输出变化。

• 无需裂解的活细胞检测模式：“0 步骤检测”极大地方便了 HTS/uHTS；对活细胞内的 cAMP 的方便监测为受体生物学提供了更为完整的分析手段。

• 高灵敏度及增加的生物相关性：方便检测低丰度内源受体；直接检测 Gi- 偶联受体的活性及在未加入毛喉萜 (forskolin) 时反相激动剂的活性。无需加入 PDE 抑制剂。