【Promega】氧化应激分析和谷胱甘肽水平检测

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氧化应激，是活性氧的产生和细胞的抗氧化防御之间的不平衡，与人类疾病以及老化相关。

氧化应激可导致细胞凋亡或细胞死亡。急性退行性疾病，如中风、动脉硬化、糖尿病、阿尔茨海默病和帕金森病，都可能因此而发展。

关于谷胱甘肽水平对细胞信号通路的影响的研究结果为干预衰老过程和治疗退行性疾病提供了新的方法。我们提供检测谷胱甘肽、线粒体功能检测、ROS 变化以及检测氧化还原型谷胱甘肽比值的检测系统，这些可作为细胞健康的指标。

氧化应激分析

谷胱甘肽是细胞中最重要和最强大的抗氧化剂。谷胱甘肽也参与第二阶段的生物转化。它可以以还原形式作为单体(GSH)或以氧化形式作为二聚体(GSSG)出现。还原的 GSH与氧化的 GSSG 的比率是氧化应激的指标。谷胱甘肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸三种氨基酸组成。除了作为还原池的主要成分外，GSH 可能是氨基酸半胱氨酸的最重要储备。为了防止例如由活性氧(ROS)引起的氧化应激，谷胱甘肽被氧化并从其还原的单体形式转变为其氧化的二聚体形式 GSSG。谷胱甘肽还原酶从GSSG 中再生两分子 GSH，过程中消耗能量。体内98% 的谷胱甘肽以还原形式存在。

Promega 提供多种氧化应激相关指标分析的方法:

谷胱甘肽水平检测

GSH-Glo™ Glutathione Assay

GSH 水平的改变对细胞毒性反应的评价非常重要，并且是氧化应激的重要指标，可能引起细胞凋亡或细胞死亡。Promega 试剂盒提供了简单、迅速的微孔板检测方案，直接检测微孔板培养细胞中总谷胱甘肽(GSH+GSSG)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平、 GSH 或 GSHIGSSG 比值，检测获得的结果既可反应细胞健康或氧化应激水平，也可用于药物开发筛选，发现能够影响细胞内谷胱甘肽水平的新化合物。

■检测原理

GSH 检测：

GSH 探针（萤光素 -NT）在谷胱甘肽 S- 转移酶的催化作用下转变为萤光素（luciferin），并与萤火虫萤光素酶反应偶联，最终检测的稳定发光信号与样品中存在的 GSH 的量成正比。

GSH/GSSG 检测：

总谷胱甘肽与 GSSG 的检测反应是平行进行的，一个反应用于检测总谷胱甘肽的量，通过用还原试剂将细胞裂解液中的所有谷胱甘肽(GSH+GSSG)都转变为还原型谷胱甘肽 GSH来实现。在另一个反应中，先用一种试剂阻断所有的 GSH同时保持 GSSG 不变，之后将 GSSG 还原为 GSH，并用发光反应来定量测定氧化型谷胱甘肽 GSSG 的含量。

由于这些检测都是直接在含有细胞的培养孔中进行的，从而使得 GSH 或 GSSG 的损失最小，减少了可变性。

■ 产品特点

△更高的灵敏度

△更快获得结果

△兼容自动化检测

△无荧光干扰

△测定具有生理相关性

△GSH/GSSG 的比值

△操作简单：无需预处理样本

△性能更强劲

■应用 : 检测化合物引起的细胞谷胱甘肽变化

●增敏化合物丁硫胺酸亚砜胺 BSO 对细胞中 GSH 消耗和恢复

Hela 细胞 (5000 细胞 / 孔铺于 96 孔板 ) 以 BSO 处理， BSO抑制 GSH 合成，从而降低细胞 GSH 水平。

20hr BSO：用 BSO 处理细胞 20 小时后检测 GSH。

BSO +Recovery：用 BSO 处理细胞 20 小时，然后用 PBS洗涤 2 次，并加入新鲜的不含 BSO 的培养基。40 小时后检测细胞中的 GSH。

40hr BSO ：用 BSO 处理的细胞 ,20 小时后洗涤，然后加入含 BSO 的新鲜培养基。40 小时后检测细胞中的 GSH。

●对乙酰氨基酚 (APAP) 在肝细胞中消耗 GSH

用 GSH-GloTM Glutathione Assay检测 24 孔板中贴壁细胞裂解液中的 GSH 水平。使用检测系统得到的 GSH标准曲线利用内插法来确定 GSH 浓度。仅在用 P450 诱导剂 30μMpregnenolone 16a-carbonitrile（PCN）处理两天后，再用5mM 对乙酰氨基酚（APAP）处理细胞 3 小时，GSH 显著降低，而仅用 APAP 或 PCN 处理引起的GSH 水平变化不大。