【Merck & Roche】Liberase™胶原酶产品详情

●用于细胞/组织分离的胶原酶

胶原酶被广泛应用于科学研究，它可以降解皮肤、血管、肌腱和骨骼中的胶原蛋白，从而分离细胞或组织。根据需要分离的特定细胞或组织类型来选择不同的胶原酶。I 型胶原酶适用于分离脂肪、肺、上皮和肾上腺组织细胞。II 型胶原酶是分离肝脏、甲状腺、骨骼、心脏和唾液腺组织的理想选择。IV 型胶原酶可分解多种组织，V 型适用于胰岛组织分离，将结缔组织分离成单细胞。胶原酶分解法是培养小鼠肾脏、成人和胎儿大脑组织的理想方法。

●用于细胞培养的胶原酶

胶原酶性质温和，使用时无需搅动，在合适的温度和 pH 值条件下就能很好地分离组织。因此它是培养小鼠肾脏、人类成人和胎儿大脑、人类肿瘤和上皮组织的理想选择。

●用作治疗药物的胶原酶

胶原酶在各种临床应用中也发挥着重要作用，包括治疗腰椎间盘和坐骨神经问题、创伤、类风湿性关节炎和骨关节炎。

特定组织的解剖和制备方式对任何组织消化——胶原酶解离的速度和效率都有显著影响。组织供体年龄的差异也可能是长期范围内的主要变化来源。确保钙离子以 5 mM 存在于消化缓冲液中。螯合剂 EGTA 和 EDTA 可通过去除酶稳定性和活性所需的钙离子而严重抑制胶原酶活性。其他抑制物质还有β-巯基乙醇、半胱氨酸和 8-羟基喹啉-5-磺酸盐。新一批具有较高比活性的胶原酶在一定浓度下可引起细胞过度死亡。在这种情况下，应使用较少的胶原酶和/或添加BSA或血清（分别高达 0.5% 和 5-10%）来稳定细胞已实现进一步的消化。

组织解离和细胞收集等脱细胞程序的最常用方法是基于蛋白水解酶的使用。蛋白酶可破坏组织的细胞外基质，从而实现单个细胞的释放或培养细胞的收集，以便转移细胞。细胞分离的目标是最大限度提高具有活力和功能活性的解离细胞的产量。

Liberase酶技术包含将梭菌胶原酶亚型纯化至高比活性的方法，以及将它们与高特异活性中性蛋白酶以最佳比例混合的方法，从而能够有效解离原代组织和培养细胞。Liberase DH Research Grade包含高度纯化的胶原酶I和胶原酶II。这两种胶原酶亚型以精确比例混合，并与高浓度Dispase（Dispase是一种非梭菌中性蛋白酶）混合。Liberase酶专用于提高组织解离的质量和可重复性，并改善分离细胞的生存能力和功能。Liberase纯化酶混合物取代了传统的胶原酶，后者是溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）的粗制、可变的发酵副产物。Liberase™ DH（Dispase High）Research Grade被用于各种组织的解离，其中，高纯度的酶混合物是高细胞产量和活力所必需的。内毒素等细菌副产物可减少数千倍。它可用于消化转移性肿瘤碎片[8]，也可用于人胚胎干细胞集落的酶促解离[9]。

① 采用含有较少梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性以及较低内毒素含量的酶混合物，最大限度提高分离细胞的活力和产量。

② 由于胶原酶I和胶原酶II的纯度较高（经过HPLC分析测定），从而提高了酶混合物的比活性。

③由于批次间的一致性较高，从而提高了实验的可重复性。

Liberase TH Research Grade包含高度纯化的胶原酶I和胶原酶II。这两种胶原酶亚型以精确比例混合，并与高浓度的嗜热菌蛋白酶（一种非梭菌中性蛋白酶）混合。

Liberase™ TH (Thermolysin High) Research Grade被用于各种组织的解离，其中，高纯度的酶混合物是高细胞产量和活力所必需的，内毒素等细菌副产物可减少数千倍。

① 含有较少梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性以及较低内毒素含量的酶混合物，最大限度提高分离细胞的活力和产量。

② 由于胶原酶I和II的纯度较高（经过HPLC分析测定），从而提高了酶混合物的比活性。

③ 批次间的一致性较高，从而提高了实验的可重复性。

④ 采用无哺乳动物或禽类组织来源性原料的酶，提高了安全性

Liberase TM研究级含有高度纯化的胶原酶I和胶原酶II。这两种胶原酶同工型以精确的比例混合在一起，并含有中等浓度的热溶酶（一种非梭状体中性蛋白酶）。

Liberase（嗜热菌蛋白酶培养基）Research Grade研究级用于广泛的组织类型的分离，其中高纯度的酶混合是高细胞产量和生存能力的必要条件。内毒素等细菌副产物可减少数千倍。

① 最大限度地提高分离细胞的存活率和产量。

② 采用了含较少的梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性，降低内毒素含量的酶混合物。

③ 依赖更高的比活性的酶混合物：由于较高纯度胶原酶I和II型(HPLC分析测定)。

④ 由于批次间的一致性，获得更高的实验重现性。

⑤ 提高安全性：采用了不含任何哺乳动物或鸟类组织衍生源材料的酶。

去细胞化过程最常用的方法，如组织解离和细胞收集等，都基于蛋白水解酶。蛋白酶可破坏组织的细胞外基质以释放单个细胞或收集以转移培养细胞。细胞分离的目的在于最大限度提高具有活性和功能活性的解离细胞。Liberase酶是一系列高度纯化酶的混合物，可提高组织解离的质量和可重复性，并提高分离细胞的活力和功能性。Liberase纯化酶混合物可取代传统的酶。

Liberase™ TL (低嗜热菌蛋白酶）研究级可用于广泛类型的组织解离，而其中高纯度的酶混合物是实现高细胞产量和活性所必需的。细菌性副产物（如内毒素），可降低数千倍。该产品已用于小鼠胰岛细胞分离。

Liberase TL研究级含有高度纯化的胶原酶I和胶原酶II。这两种胶原酶异构体以精确的比例相互混合，并含有低浓度的嗜热菌蛋白酶（一种非梭菌中性蛋白酶）。

●通过利用含有较少梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性，以及更低的内毒素含量的酶混合物，实现分离细胞活力和产量的最大化。

●因胶原酶I+II纯度（由HPLC分析测定）更高，有助于实现酶混合物的更高特异性活性。

●更高的批次间一致性，可获得更高的实验可重复性。

●不含任何哺乳动物或禽类组织来源原材料的酶，提高安全性。

用注射级无菌水或组织解离缓冲液重悬冻干酶。不要在解离缓冲液中添加血清或其他成分（如白蛋白或蛋白酶抑制剂）。在较高浓度和较高温度（4°C）下，酶的稳定性会降低。应避免上述两种条件。

① 重悬全部内容物。不要称量冻干品的独立分装品。水分进入包装小瓶，将导致酶活性下降。

② 将冻干酶再水化时，应将小瓶置于冰上。

③ 在2至8℃下轻轻摇动小瓶，直至酶完全溶解（最多30分钟）。

④ 在某些用于溶解Liberase研究级纯化酶混合物的组织解离缓冲液类型中，可能会出现少量沉淀，这些沉淀易于溶解在稀释的工作液中，并且不影响酶活性。

⑤ 取出一份储液的分装品，制备工作溶液。

⑥ 重悬体积：2 ml（1小瓶，5 mg–10 mg包装规格）；10 ml（1小瓶，50 mg–100 mg包装规格）

参考文献

[1] Fain JN. 1975. [53] Isolation of free brown and white fat cells.555-561. https://doi.org/10.1016/0076-6879(75)35184-7

[2] Seglen PO. 1976. Chapter 4 Preparation of Isolated Rat Liver Cells.29-83. https://doi.org/10.1016/s0091-679x(08)61797-5

[3] Buitrago A, Gylfe E, Henriksson C, Pertoft H. 1977. Rapid isolation of pancreatic islets from collagenase digested pancreas by sedimentation through percoll? at unit gravity. Biochemical and Biophysical Research Communications. 79(3):823-828. https://doi.org/10.1016/0006-291x(77)91185-8

[4] Bellemann P, Gebhardt R, Mecke D. 1977. An improved method for the isolation of hepatocytes from liver slices. Analytical Biochemistry. 81(2):408-415. https://doi.org/10.1016/0003-2697(77)90711-4

[5] Ives HE, Schultz GS, Galardy RE, Jamieson JD. 1978. Preparation of functional smooth muscle cells from the rabbit aorta.. 148(5):1400-1413. https://doi.org/10.1084/jem.148.5.1400

[6] Fain JN, Loken SC. 1969. Response of Trypsin-treated Brown and White Fat Cells to Hormones. Journal of Biological Chemistry. 244(13):3500-3506. https://doi.org/10.1016/s0021-9258(18)83400-7

[7] Berry, M, Edwards, Aa, Barritt, G. 1991. Isolated Hepatocytes; Preparation, Properties and Applications.Elsevier..

[8] Activation of c-Met and upregulation of CD44 expression are associated with the metastatic phenotype in the colorectal cancer liver metastasis model.PloS one (2014-05-16)

[9] Derivation of neural precursor cells from human ES cells at 3% O(2) is efficient, enhances survival and presents no barrier to regional specification and functional differentiation.Cell death and differentiation (2011-01-29)