【Merck】PCR/qPCR：核酸提取相关产品

蛋白酶K属于广谱丝氨酸蛋白酶，是通用的降解蛋白的酶，可以去除核酸样品中的蛋白干扰，例如: DNases和RNases，保护核酸样品不被降解，广泛用于人组织或细胞的核酸提取。

产品描述

品质保证: 行业标杆，值得信赖。默克蛋白酶K的严格生产工艺保证了酶的稳定性具有优异的可靠性和纯度，更好地满足诊断的要求。

商品酶中未检测到核酸的残留，所以特别适合后续P CR和RT-PCR对扩增产品进行分析。

包装齐全:粉未、液体大小包装，多种规格可选。

应用

●在DNA和RNA的分离纯化过程中用于核酸酶的蛋白水解

失活

●去除与阳离子蛋白质如溶菌酶和Rnase A结合的内毒素

●处理石蜡包埋的组织切片以暴露抗原或核酸结合位点用于抗体或探针标记

优点

●稳定的实验结果可靠的品质和良好的批间差控制是分不开的，蛋白酶K产品结合了先进的生产工艺，批间一致性经过严格的分析测试

●增加目的基因扩增产物严格的检测确保无核酸酶的残留

●有效的隔离低拷贝模板

粉末蛋白酶K

颜色: 白色

状态:干粉

酶活性

(hemoglobin; pH 7.5; 37C): 2 30.0 mAnsonU/mg

酶比活(calc.on protein): ≥ 40 mAnsonU/mg DNases (Nicking activity; pBR 322; 6 h; 37C)not detectable 

RNases (RNA; 2 h; 37C): not detectable

液体蛋白酶K

颜色: 白色

状态: 液体

包装: 10ml，1L

酶活性(hemoglobin; pH 7.5;37C):> 600 mAnsonU/ml

浓度: ≥ 0.01 mol/

DNases (Nicking activity; pBR 322; 6 h; 37C):not detectable

RNases (RNA; 2 h; 37C): not detectable

将链霉亲和素修饰微球应用于生物分离、生物纯化或生物检测是基于链霉亲和素和生物素标记的分子具有很高的亲和力。

链霉亲和素与生物素的结合力强(Kd=10-15M)，这让分离纯化、检测生物素修饰的分子能够在不同的pH值(3-10)、缓冲液(0.01-3.0M盐浓度)、以及含有诸如SDS或吐温-20等祛垢剂的条件下进行，不受任何影响。链霉亲和素修饰的磁性微球为分离或纯化各种生物素标记分子(包括血液、血清、组织和食品等不同来源的抗原、抗体或核酸)提供了一个稳定的固相。目前，链霉亲和素修饰的微球已用于检测适体aptamer-蛋白反应的电化学方法上(9)以及耐田氧西林金黄色葡萄球菌的快速检测上(2)

其它应用: 细菌浓缩、人或动物细胞分离、蛋白质组、学PCR 产物纯化

Estapor®超顺磁性羚基微球

据研究表明，除了表面为硅轻基修饰的纳米磁颗粒，表面为羚基修饰的磁性微球同样适用于PCR产物、质粒DNA以及细菌DNA的提取和分离¹。Estapor®超顺磁性微球系列产品，在DNA提取应用方面积累了较多的经验，在粒径、表面和磁含量方面都能给您众多选择。

羚基磁性微球提取DNA的作用机理是在聚合物以及阳离子盐的共同作用下引发的磁珠/DNA的聚集作用。通常状态下的DNA分子呈无规则卷曲状态，当缓冲液中同时加入一定浓度的PEG和NaCI时，DNA分子的卷曲状态会塌缩，逐渐形成更为稳定的球状结构。该球状结构的折叠部分几乎为电中性，仅剩下10%的未折叠卷曲部分带负电。因此，在这样的高盐环境下，磁性微球表面与DNA分子产生静电屏蔽，通过氢键作用产生结合。在完成DNA分子的吸附步骤后，磁性微球再经过醇洗和低盐缓冲液的洗涤，即可最终获得目标D NA分子。其中值得注意的是，针对不同分子量大小的DNA分子，我们应该对PEG的分子量、PEG浓度、NaCI浓度以及后续洗脱步骤等进行工艺上的优化^2,3。

经典的核酸(DNA和RNA)分离方法依赖于浓度梯度离心和苯酚- 氯仿萃取。这两种方法耗时、费力，几乎不能自动化，还需使用危险化学品。如今，各大公司正致力于开发更加安全的解决方案提高核酸纯化的通量。

MagPrep Silica磁颗粒(如图1所示)正为满足这一需求而开发，通过磁分离的方法用于自动化核酸纯化方案中。

MagPrep® Silica磁颗粒带有正电荷，易于吸附带负电荷的核酸，主要用于从人血清或血浆样品中提取DNA和RNA(例如从血液样本中检测HIV或HBV病毒基因组的样品制备)。一般而言，将样品与结合缓冲液和MagPrepe Silica磁颗粒混合，核酸与磁颗粒结合后，经过数次洗涤与磁场捕获，洗脱下来的核酸即可通过PCR或其它特定方法来检测病毒特异DNA或RNA。目前，MagPrep® Silica作为原料已广泛用于诊断行业的高通量自动化系统中。

MagPrep® Silica磁颗粒的物理属性

●直径:~100nm

●组分: >95%的磁铁矿

●表面积: 16-22 m²/mg(无孔)

●吸附能力: 10ug DNA或RNA/mg

MagPrep®硅粒子独特功能

●能从全血中吸附白细胞核酸

●能从生长基质中吸附细菌核酸

●能从血浆中吸附病毒核酸

●能在高离液和酸性条件下吸附核酸

●可使用水性或含乙醇的缓冲液洗涤

MagPrep Silica磁颗粒是由表面包裹着一层硅的磁铁矿组成这些悬浮在缓冲液(50mM MES，pH 5.5)中的黑色颗粒平均粒径为100nm(通常为50-200nm)。小粒径的磁颗粒拥有更大的表面积，这对能否从大量样本中成功提取微量的目的分子至关重要。此外，粒径小的磁颗粒可保持几分钟的悬浮状态，这也为目的分子的结合提供了充裕的时间。

由于磁含量高达95%，磁颗粒很容易在磁场中迅速分离。通常情况下，磁场捕获反应在2分钟内即可完成。

磁分离技术让各大实验室能够在一天时间内实现成千上万的核酸样本自动化纯化。此外，该技术在检测诸如细胞粗提取物或类似食品粗匀浆物等复杂样品时也具有优势。

简介

●粒子浓度: 5%(50 mg/ml)

●包装规格: 1 ml、5ml、10 ml 及客户订制大包装

●缓冲液: 粒子悬浮在水中

●保存: 保存于4-8°C

MagPrep®硅粒子的应用

●吸附细菌

●吸附病毒

●吸附白细胞

●分离血液中的全DNA

●分离细菌中的全DNA

●分离病毒DNA/RNA

●纯化PCR片段

●去除测序反应中的染料

●分离质粒DNA

我们可提供 3 种 MagPrep Silica 磁颗粒:“LS”(基础型)“MS”型和“HS”型。"LS”型吸附 RNA 效果好，在特定条件下，也能吸附 DNA。HS”型选择性吸附 DNA。"MS”型可同时吸附 DNA 和 RNA。用户可根据核酸纯化过程中的结合、洗涤条件以及样本类型的不同选择适用搭配。

MagPrep Silica磁颗粒使用要点

重悬

MagPrep Silica为50mg/mI黑色颗粒的悬浮液，在使用前需要重悬混匀。常见的重悬方法包括上下振荡、涡旋等方法。其中常见有效的是使用带有1ml tip头的移液器反复吹打。对于更大体积的容器，可置于滚瓶或摇床混合几分钟重悬后需用肉眼检查容器内悬浮液的残余颗粒。需要值得注意的是在使用全自动系统时，洗涤步骤中的重悬可以通过循环磁场使磁颗粒沿交替方向移动。

分离

MagPrep Silica 磁颗粒90% 以上成份为磁铁矿，因此易于在磁场中快速分离。由不同厂家提供的绝大多数磁架为永磁体，使用效果理想。通常，当体积为1ml时捕获反应耗时少于5分钟。对于分离更大容量或体积，则需要更多的时间，使用更大或更强的磁铁。磁分离技术对高通量自动化系统的样品处理或处理诸如细胞粗提取物或食品类粗匀浆等复杂样本时非常有优势。然而，如非必须使用正交分离时，也可通过短时间的离心分离小且“重” 的颗粒。

孵育

目标分子在结合的过程中通常没有必要使磁颗粒保持悬浮因为整个反应只需要数秒，而磁颗粒的悬浮状态会持续几分钟。对于其他的孵育步骤，如果需要固定升温，则建议使用震动器或混合器。

结合

DNA和RNA在不同结合缓冲液中都可结合到Ma gPrep@

Silica 磁颗粒的表面。有两种常见的化学品会促进结合，分别为高浓度的离液剂或酸性结合缓冲液。缓冲液的成分在操作步骤中会列出以供参考。当样品含有去垢剂时(如SDS)，高浓度离液例如5M的硫氰酸瓜与乙醇或异丙醇的混合物也可作为结合缓冲液。

洗涤

DNA或RNA与磁颗粒结合后可用多种水性洗涤缓冲液清洗

目标分子不会在洗涤过程中洗脱下来。水性洗涤缓冲液有些情况下会略偏酸性或含有适量乙醇。

洗脱

洗脱缓冲液的pH值通常高于8.0，且反应过程需要升温。其他条件或缓冲液也是可行的。使用甲酷胺洗脱非常有效且可在室温条件下进行，不过下游应用领域较少。洗脱效率可将重悬后的磁颗粒加入到琼脂糖中通过电泳检测。电洗脱的核酸可通过EB染料或其它方法检测。

GenElute™ 血浆/血清游离循环DNA中量纯化试剂盒（DNB600）

GenElute™血浆/血清游离循环DNA中量纯化试剂盒基于离心柱层析法，用于从1mL~4ml新鲜或冷冻血浆/血清样品中方便、快速、可靠地提取各种大小的游离循环DNA(CfC-DNA)，纯化所得的血浆/血清CfC-DNA将在洗脱液中进行洗脱以兼容任何下游应用，包括PCR、实时定量PCR、甲基化敏感的PCR和Southern印迹分析、微阵列和NGS等。

快速高效:可在40-45分钟内纯化出各种大下的循环DNA

高度纯化: DNA质量高,不含抑制物

一泛兼容:兼容任何下游应用

使用灵活: 样品起始量可1-4ml,洗脱体积可50-100ul

验证数据:分别从0.5、1、2和4ml血中纯化循环DNA(左)分别取2ul纯化的DNA进行GPCR检测5S rRNA基因的相对含量5S RNA随着样本量增加呈线性增长，表明其更好的一致性和得率，(中)PCR测5S rRNA基因的线性度;(右)PCR反应中增加模板量不影响或Ct值降低表明获得的DNA纯度高，不含PCR抑制物。

Benzonase®核酸酶是一款广谱的核酸酶，即作用于DNA也作用于RNA，在病毒基因组测序中可以降解宿主细胞的核酸，而不作用于病毒核酸，最适的酶活pH为8.0-9.2。它可将核酸完全消化为长度为3至5个碱基的5”-单磷酸末端寡核甘酸，这对于病毒等微生物基因测序应用是非常理想的选择。

在基因测序实验中，因为扩增产物序列需要真实性，我们无法在反应体系中添加UNG，使用Benzonase®核酸酶处理气溶胶也是不错的选择。

注:使用 EDTA 螯合金属离子可实现可逆抑制。不可逆的灭活只能在特殊条件下(70°C 下 100 mM NaOH 在 30 分钟内完成。

核酸提取辅料