【Merck】Amicon® Ultra超滤管常见问题解答
Q: Amicon® Ultra超滤管的膜材质是什么？
A: Amicon® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracel® 再生纤维素膜，生产工艺严格，截留分子量明确而精准，蛋白吸附损失最小。
Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？
A: 按照经验，建议两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）。
Q: Amicon® Ultra超滤管可以用于病毒浓缩么？
A: 可以。对于慢病毒推荐Amicon® Ultra 100kDa; 对于腺病毒推荐Amicon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关病毒）的制备方法供参考。
Q: Amicon® Ultrar超滤管可以用酒精消毒灭菌么？
A: Amicon® Ultra与70%乙醇是兼容的，但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。建议采用Ultrafree无菌离心管对浓缩后的样品进行过滤除菌（请参见本手册第25页）。
Q: Amicon® Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌？
A: Amicon® Ultra都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
Q: Amicon® Ultra超滤管是否不含RNA酶？
A: 不保证超滤管不含RNA酶，建议用0.1% DEPC在37度浸泡2小时，以完全灭活RNA酶；残留的DEPC可以用Milli-Q®超纯水洗涤除去。
Q: 用Amicon® Ultra超滤管去除去污剂是有什么需要注意的吗？
A: 去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果，具体的操作步骤请垂询默克密理博技术支持专线400-889-1988。
Q:蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1）离心力降为推荐离心力的30%-50%
2）改用截留分子量更大的超滤管（如原本选用10k，此时可以选择30k）
3）在浓缩过程中取出超滤管，用枪头反复吹吸几次后再继续浓缩
4）体积较大的样品可考虑选用搅拌式超滤杯，减少沉淀的发生。
Q: 有时候用超滤离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
A: Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况，请先用0.1 N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
Q：说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
A：可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长到原来的1.5倍。
Q: 浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白最低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
Q：如何对超滤管进行去除内毒素的处理？
A：提 供 的 超 滤 管 是 没 有 经 过 去 内 毒 素 处 理 的，同 时 由 于 内 毒 素 通 常 以 多 聚 体 的 形 式 存 在，大 小 在10-1000KD之间不等，在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗，随后用Milli-Q®水/缓冲液清洗的步骤去除大部分内毒素。关于针对Amicon®,Microcon®, Centricon® 尝试过的内毒素去除方案，请垂询默克密理博技术热线（400-889-1988）。
Q: 用浓缩后的蛋白做下游分析时发现有干扰，可能有哪些原因？
A：Amicon® Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析，可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。
Q：怀疑浓缩过程中目的蛋白和超滤膜之间可能存在非特异性吸附，如何改善？
A：Amicon® Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜，这种材质是蛋白吸附最低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白，它们和膜的非特异吸附可能会增强。对于这种情况，可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理，详细步骤请垂询默克密理博技术热线(400-889-1988)。也可以尝试换成Amicon® Ultra 0.5或2来进行实验，通过减小膜面积来降低非特异性吸附。
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
