衰老重编程通过协调的基因调控释放肿瘤免疫监视功能
该研究开发了靶向基因递送纳米颗粒TEPP，通过协同调控P16INK4a过表达与PD-L1敲低，重编程肿瘤衰老-免疫轴。TEPP借助uPAR靶向、TERT启动子及NLS-MTAS肽，实现肿瘤特异性基因递送与表达，增强肿瘤免疫原性并缓解免疫抑制。在三阴性乳腺癌、结直肠癌等多种肿瘤模型中，TEPP单药或联合免疫检查点抑制剂（如αCTLA-4）均展现出强效抑瘤、抗转移及防复发效果。该系统无明显系统毒性，为“冷肿瘤”的免疫治疗提供了可行策略。
Advanced Materials 2025年8月 IF26.8
1. 细胞衰亡可通过 SASP 招募免疫细胞发挥抗肿瘤作用，但免疫耐受及免疫抑制性TME会显著限制其治疗效果。
2. P16INK4a 能诱导肿瘤细胞衰老并增强免疫原性，却会通过上调或稳定 PD-L1，导致肿瘤发生免疫逃逸，削弱治疗效果。
3. 治疗诱导衰老易引发 T 细胞耗竭，现有联合治疗存在非特异性分布、肿瘤耐药等问题，临床应用受限。
4. 基因治疗可实现治疗分子持续表达，但缺乏精准靶向递送系统，现有纳米载体存在瞬时活性、易被巨噬细胞清除等不足。
5. uPAR 在衰老细胞上选择性高表达，为肿瘤特异性靶向递送提供了潜在靶点，成为解决现有治疗瓶颈的关键突破口。
1. 明确科学问题与核心靶点：
针对细胞衰老疗法中 “P16INK4a 诱导肿瘤衰老但上调 PD-L1 导致免疫逃逸” 的矛盾，以及现有递送系统缺乏特异性、易被清除的缺陷，确定 “协同调控 P16INK4a（过表达）与 PD-L1（敲低）” 为核心治疗策略，同时发现 uPAR 在衰老肿瘤细胞上选择性高表达，将其作为靶向递送靶点。
2. 设计多功能靶向递送系统
构建 TEPP 纳米颗粒，以 PBAE 和 PBAE-NLS-MTAS 为核心载体（提升核递送效率），表面修饰 CS（结合肿瘤 CD44 受体）和 uPAR 抗体（精准靶向衰老肿瘤细胞），并搭载含 TERT 启动子的双功能质粒 pP16SP（实现肿瘤特异性基因表达）。
3. 分阶段验证功能与疗效
先通过体外实验验证 TEPP 的细胞摄取、质粒递送效率，以及对肿瘤细胞周期停滞、免疫原性提升的作用；再在体内皮下、肺转移、术后复发及自发肿瘤模型中，评估 TEPP 单药的抑瘤效果和生物安全性；最后探究 TEPP 与 αCTLA-4 免疫检查点阻断（ICB）的协同治疗潜力。
4. 解析作用机制与拓展应用
通过转录组、流式细胞术等分析 TEPP 对肿瘤微环境（TME）的重塑作用（激活 CD8+T 细胞、NK 细胞等免疫细胞，减少免疫抑制细胞）；明确其通过 SASP 增强免疫原性、阻断 PD-L1 介导免疫耐受的双重机制，为 “冷肿瘤” 免疫治疗提供新方案。
1. P16INK4a 过表达通过衰老相关分泌表型（SASP）增强肿瘤免疫原性并促进免疫细胞浸润
临床层面：CDKN2A 基因突变（编码 P16INK4a）或 P16INK4a 低表达，与乳腺癌、结直肠癌患者不良预后相关。
体外实验：P16INK4a 过表达可诱导肿瘤细胞衰老，提升 MHC-I 分子及抗原呈递相关基因表达，促进 SASP 相关促炎因子分泌。
体内效果：在小鼠肿瘤模型中，P16INK4a 过表达能升高肿瘤组织 MHC-I 水平，通过 SASP 的趋化作用，显著增加 CD4 + 和 CD8+ T 细胞在肿瘤部位的浸润。
2. P16INK4a 与 PD-L1 表达的协同调控有效克服免疫抑制
P16INK4a 过表达增强肿瘤免疫原性的同时，会上调 PD-L1 引发免疫耐受和 T 细胞耗竭。
构建双功能质粒 pP16SP，协同实现 P16INK4a 过表达与 PD-L1 敲低。
该质粒可显著提升免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，有效克服免疫抑制。
3. uPAR 靶向纳米颗粒 TEPP 的开发与表征
确认uPAR为肿瘤衰老特异性靶点，其表达随 P16INK4a 过表达显著上调。
构建TEPP纳米颗粒，以 PBAE-NLS-MTAS 为核心，修饰 CS 和 uPAR 抗体实现双靶向。
TEPP理化性质稳定，包封率高，可靶向富集于肿瘤组织，提升基因递送效率，且能减少巨噬细胞清除。
4. TEPP16SP 在体外诱导细胞周期停滞并激活免疫
TEPP16SP 在体外可诱导肿瘤细胞 G1 期停滞并使其衰老。
能提升肿瘤细胞免疫原性（MHC-I↑、PD-L1↓）。
促进 T 细胞迁移与杀伤，激活 BMDC，增强抗肿瘤免疫应答。
5. TEPP16SP 的体内肿瘤特异性表达及抗肿瘤疗效
采用 TERT 启动子，实现 TEPP16SP 在肿瘤组织的特异性表达，降低脱靶效应。
在 TNBC 模型中展现强效抑瘤作用，抑制率显著优于单一基因调控策略。
3.治疗无明显全身毒性，生物安全性良好。
6.TEPP16SP 重塑免疫抑制性肿瘤微环境（TME）
TEPP16SP 可显著改变肿瘤组织转录组，激活免疫相关通路。
增加 NK 细胞、CD8+T 细胞等效应免疫细胞浸润，提升 DC 成熟度和 M1 巨噬细胞比例。
减少免疫抑制性细胞（如 MDSCs），有效重塑免疫抑制性 TME，增强抗肿瘤免疫。
7. TEPP16SP 联合免疫检查点阻断（ICB）的抗肿瘤效应
TEPP16SP 与 αCTLA-4 联合治疗，在 CRC、TNBC 转移及复发等多种模型中均显著提升抗肿瘤效果。
联合治疗可减少肿瘤微环境中 Tregs，增加记忆 T 细胞，强化免疫记忆与效应 T 细胞浸润。
能有效抑制肿瘤原发、转移及术后复发，显著延长荷瘤小鼠生存期。
TEPP16SP通过协同调控P16INK4a过表达与PD-L1敲低，重编程肿瘤衰老-免疫轴，强化抗肿瘤免疫。该纳米系统以uPAR为靶向靶点，结合 TERT 启动子与NLS-MTAS肽，实现肿瘤特异性高效基因递送。
其单药可有效抑瘤，联合免疫检查点阻断疗法能显著提升多种肿瘤模型（原发、转移、复发）的治疗效果，为免疫 “冷肿瘤” 提供新策略。
未来需进一步拓展靶点与肿瘤类型，优化治疗安全性与适用性。
首创 “P16INK4a 过表达 + PD-L1 敲低” 协同调控，破解衰老诱导伴随的免疫逃逸难题。
构建 uPAR 靶向的 TEPP 纳米系统，实现肿瘤特异性、高效基因递送。
联合 ICB 拓展至转移、复发等多肿瘤场景，强化免疫记忆，提升治疗适用性。
