【Cytiva】WB凝胶电泳之分子量标记

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Cytiva 28941279 28944045 80648356 28932235 28932248 28932317 28932361 80648470 80648451 80620958 80620426 80621034 11001341 80621186 11001342 80641877 80641896 80647957 RPN755E RPN756E RPN800E RPN810 RPN850E RPN851E 17044601 17061501 29030735 10600002 106

分子量标记用于定义在凝胶中运行的蛋白质的大小。标记蛋白由已知大小的不同蛋白质组成，在整个过程中迁移的距离提供了一个对数尺度，用来估计未知蛋白质的大小。对于大多数运行，在凝胶上保留至少一条单独的泳道来运行分子量标记。除估算蛋白大小外, 还包括可见分子量标记, 可以在整个电泳过程中监测蛋白质的进展，并评估蛋白质从凝胶转移到膜的效率。

GE的大量预染色和未染色分子量标记可让您从3500到 669 000 (表 1) 范围内估算印迹蛋白的分子量。

表1 page 和免疫印迹分子量标记的概述

产品	形式
Full-, High-,and Low-Range Rainbow™ Molecular Weight Markers	可见的, 彩色带在凝胶和斑点
Amersham ECL DualVue™ Western Blotting Markers	用于ECL应用的组合芯片；包括用于监测迁移和穿梭的预处理芯片, 以及可通过化学发光检测的标记蛋白, 可在胶片上或通过基于电荷耦合的器件 (ccd) 摄像机成像仪进行检测。
Amersham ECL Plex Fluorescent Rainbo Markers	可见的, 彩色带在凝胶和斑点上。在基于荧光的成像仪(激光扫描仪) (如Tphoon™) 中的 cy™5和 cy3 通道中检测到荧光
Amersham WB molecular weight markers Protein Molecular Weight Markers	荧光检测, 蛋白质标记为 cy3 和 cy5具有多个染色选项的未标记蛋白质标记。带可以使用库马西明亮的蓝色或银色染色进行可视化

彩虹分子量标记蛋白

彩虹分子量标记 (图 1) 可通过SDS-PAGE快速、简单地识别蛋白质。这些现成的标记在凝胶和印迹上提供锐利、强烈的带数和离散的带间距, 从而能够准确地确定分子量。

标记的明亮、独特的颜色可以确认转移到印迹膜和方向。该试剂由单独着色的蛋白质混合而成, 并结合在一起,产生相同颜色强度的波段。彩虹分子量标记有三个大小范围: 全范围 (10种蛋白质, Mr 12 000 到 225 000);高范围 (8 种蛋白质, Mr12 000 至 225 000);或低范围 (7种蛋白质, Mr. 3500 至 38 000)。

图1 彩虹分子量标记有三个大小范围可供 sds-page 使用。全、高、低范围 (从左到右)。

Amersham ECL DualVue免疫印迹标记

Amersham ECL DualVue免疫印迹标记 (图 2) 可以表示两个关键功能。首先, 预处理的蛋白质试剂可以让你监测蛋白质电泳,并确认从凝胶转移到膜, 除了明确定义印迹方向。其次, 标记重组蛋白可在视野中检测, 或结合基于CCD相机的成像与目标蛋白结合使用, 从而实现高精度的分子量测定。标记消除了目标蛋白质和标记之间的任何交叉污染。

该试剂包含三个颜色的预染色彩色标记的定义分子量 (Mr 15,000， 16, 000和100, 000) 和七个标记重组蛋白 (Mr15, 000 至 150, 000) 的混合物。该产品与任何HRP基板以及聚偏氟乙烯 (pvdf) 和硝化纤维素膜兼容。Amersham ECL DualVue免疫印迹标记被推荐用于化学发光检测使用试剂, 如 amersham ecl, amersham ecl prime, 和 amersham ecl 选择。

图2 Amersham ECL DualvuE Western印迹标记后，在4%至20% SDS凝胶电泳，并转移到A Amersham Hybond™ ECL nitrocellulose membrane硝酸纤维素膜（现在由Amersham Protran™ Premium 0.45硝酸纤维素印迹膜取代）。预染指示蛋白显示为膜（a）的照片，以及在1分钟暴露（b）后用Amersham ECL检测后标记的重组蛋白作为膜的照片。

Amersham ECL Plex荧光彩虹分子量标记蛋白

这些蛋白质分子量标记优化用于Amersham ECL Plex Western印迹检测系统，在凝胶和膜上提供可见标记带，以及使用基于荧光成像仪的Cy3和Cy5通道的图像，如typhoon。

●对于10x10 厘米的微型凝胶, 每条泳道应应用1.5 至3μl 的Amersham ECL Plex荧光彩虹标记(图 3)。超载会干扰邻近泳道上样品的分析。如果要检测到低丰度蛋白质, 则只加载1.5 μl 的标记, 或者在样本和标记之间加载一条泳道。

图3 在Typhoon扫描仪上成像的Amersham ECL Plex荧光彩虹标记。从左到右: (a) 全彩 cy3 和 cy5;(b) cy3 通道;(c) cy5 通道;和 (d) 可见光谱。

Amersham WB分子量标记蛋白

Amersham WB分子量标记 (图 4) 是九种原始和重组蛋白的混合物, Mr 10 000 至 225 000, 标有 cy3 和 cy5, 用于分子量测定扫描凝胶卡和 pvdf 卡上的蛋白质。在Western实验中, 在装入凝胶卡之前, 应在加载缓冲液中稀释 amersham wb 分子量标记。

图4 在 cy3 和 cy5 通道中都可以看到 amersham wb 分子量 (mr) 标记

未标记分子量标记蛋白

通过使用SyPro™Ruby、考马斯亮蓝或银染色等总蛋白染色，可以在电泳后观察到未标记的分子量标记。标记物可用作低分子量（LMW）-SDS标记试剂盒（MR 14000至97000）、高分子量（HMW）-SDS标记试剂盒（MR 53000至220000）和HMW天然蛋白标记试剂盒（MR 66000至669000）。

利用分子量标记测定未知蛋白质的分子量

当SDS处理的蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶迁移时，分子量对数与行进距离之间存在线性关系。

未知蛋白质的分子量可以通过绘制标记物相对迁移距离（Rf）和其分子量的对数来计算（图5）。根据这个校准图，可以计算出样本中蛋白质的分子量大小。