【Cytiva】层析应用指南 ：生物制品工艺路线

应用领域：治疗性抗体

简介

抗体也叫免疫球蛋白(lg)，是一大类能与抗原产生特异性结合的蛋白，现在常见的治疗性抗体药物包括: 全抗、抗体片段、ADC、双抗等。

推荐层析方法

●抗体片段纯化平台

抗体片段(例如: Fab，sFv，Dab等)也是一类非常重要的生物类治疗药物。由于抗体片段在结构上缺少Fc段，因此不能使用与Fc段特特异性结合的Mabselect Su Re和Mabselect SuRe LX等介质来进行亲和捕获。

但是耐碱性改造后的Mabselect PrismA保留了与抗体重链可变区的结合能力，因此该填料是可以用于抗体片段的亲和捕获纯化阶段。同时，针对不同的位点，我们提供了Capto L(结合kappa型轻链的可变区)KappaSelect 和LambdaFabSelect(分别结合Kappa和Lambda轻链的恒定区)等亲和填料。

精细纯化可采用经典阴阳离子层析纯化，也可采用复合模式填料。

●双特异性抗体纯化平台

双特异性抗体(BsAbs)是抗体药物的衍生物，具有结合两个相同或者两个不同表位的能力的抗原。从结构上来说，双特异性抗体可以分为两大类，即带有Fc段的(lgG-like BsAbs)和不带有Fc段的(Non-lgG-like BsAbs)。

对于IgG-like BsAbs的纯化，由于其细胞培养过程中存在多种不同的产品相关杂质，会采用不同的层析纯化手段。

对于Non-lgG-like BsAbs的纯化平台可以参考抗体片段类药物的纯化平台。

●抗体药物偶联物层析纯化

抗体药物偶联物，即Antibody-drug Conjunctions，ADCs，是将化学毒素小分子与单克隆抗体进行偶联，利用单抗药物的靶向性将毒素直接带入肿瘤细胞进行杀伤，既降低了毒素小分子的毒性，同时又增加了单抗药物的治疗效果。

ADCs药物的单抗部分纯化可以采用抗体纯化平台工艺进行。单抗药物与毒素的偶联工艺，毒素小分子的去除一般采用脱盐(Sephadex G 25)或者超滤的方式进行。

应用领域：多糖疫苗

简介

推荐层析方法

●流脑多糖纯化工艺

目前流脑多糖疫苗分为A，C，W 135，Y这四群将粗糖通过Capto adhere和Capto DEAE两种层析介质串联，利用流穿模式对其进行分离纯化。

●b型流感嗜血杆菌英膜多糖的纯化

这是一类革兰氏阴性杆菌,是引起婴幼儿化脓性脑膜炎、肺炎、会厌炎、化脓性关节炎等局部和侵染性感染的病原体。将预处理后的粗糖溶液通过Capto adhere层析介质，通过吸附洗脱的模式进行分离纯化。

●23价肺炎多糖疫苗纯化工艺

肺炎球菌引起肺炎，脑膜炎，败血病等症状，尤其是老年人和儿童是感染的高危人群。23价疫苗层析工艺，比传统的工艺具有更好的产率和效率。23种产品只需要通过四套层析工艺就可以得到，十分高效，主要用到了Capto adhere，Capto DEAE和Sephadex G 25这三种填料。

应用领域：病毒疫苗

简介

如乙肝、HPV、狂犬疫苗等

推荐层析方法

●甲肝疫苗的纯化:

甲型病毒性肝炎，简称甲肝，是由甲型肝炎病(HAV)引起的，以肝脏炎症病变为主的传染病。利用Sepharose CL-4 B/Sepharose 4 FF和DEAE Sepharose CL-6 B/DEAE FF两步层析可以纯化HAV。

●乙肝疫苗的纯化:

中国是乙肝的高流行区，国家对乙肝疫苗的研发及生产很重视。针对CHO细胞表达的乙肝疫苗，可以采用Buty-S Sepharose 6 Fast FlowB/E)、DEAESepharose Fast Flow (B/E)、Sepharose 4 Fast Flow三步层析进行纯化。

针对酵母表达的乙肝疫苗，可以采用Butyl Sepharose 4 B/ Capto Butyl这两款疏水填料来纯化。

●狂犬病疫苗的纯化:

可以使用超滤浓缩配合凝胶过滤Sepharose 4 FF或者capto Core 700 的方式纯化狂犬病疫苗。

新一代病毒纯化介质Capto Core 700，新型的核心微球技术以及复合模式、辛胺配基使Capto Core 700 在一种层析填料中具有大小分离以及吸附层析的双重功能可以更加高效的纯化病毒，有效的去除卵清蛋白、宿主蛋白和DNA片段等杂质。

●轮状病毒疫苗的纯化：

轮状病毒大小60-80nm，利用Vero细胞表达的轮状病毒疫苗经过超滤浓缩处理后步层析使用Capto Core 700纯化，病毒收率在80%以上。

●类病毒颗粒(VLP)的纯化:

VLP能够诱导强烈的免疫反应，但它们无法复制。因此，通过使用VLP感染的风险很低。VLP的分子量往往高于2000 KDa，可以利用Capto Q和SephacrylS-500 High Resolution(HR) 的凝胶过滤做VLP组分的分离。

●肠道病毒71型(EV 71)的纯化:

EV 71是引起儿童手足口病的最重要病原体。EV 71-VLP或者全病毒灭活苗都可以使用分子筛层析Sepharose 4 FF+Q FF或升级工艺Capto Core 400+Capto Q/Capto Q ImpRes/Q XL进行纯化。

应用领域：病毒载体的纯化

简介

病毒载体如慢病毒、腺病毒、腺相关病毒，广泛应用在细胞治疗和基因治疗领域。

推荐层析方法

●基因治疗需要利用载体将起治疗作用的基因导入靶细胞使其与宿主染色体整合为一体或在宿主细胞中表达，从而起到治疗的作用。

●基因治疗载体中常用的病毒载体有逆转录病毒载体，腺病毒载体AdV，腺相关病毒载体AAV，慢病毒载体和单纯疤疹病毒载体等。

●对于腺病毒和慢病毒来说，可以采用Capto Core 700加上Capto QImpres来做层析纯化; 对与腺相关病毒，可以采用Capto Core 400加上Capto Q Impres来纯化，也可以采用capto AVB(亲和填料)来纯化。

应用领域：超螺旋质粒DNA的纯化

简介

质粒DNA(PDNA)，可以作为基因疫苗(或核酸疫苗)，也常用于细胞/基因治疗领域，进行病毒载体的制备。

推荐层析方法

处理流程包括：

●用Sepharose 6 Fast Flow进行基团分离除RNA和缓冲液交换

●用PlasmidSelect Xtra或者Capto Plasmid Select捕获和选择性吸附sc质粒DNA

●最后用 SOURCE30Q或者capto Q Impres进行精纯

整个处理过程高容量、高产量，能规模放大以在高度调控的环境下进行经济的工业生产

应用领域：凝血因子的纯化

简介

血友病(Hemophilia)是一种由一种或多种凝血因子缺陷或结构异常导致的遗传性出血性疾病。

推荐层析方法

用于大规模纯化凝血因子的亲和层析介质包括VIISelect、VIlSelect、 XISelect，另外Capto Heparin也可以用于纯化凝血因子、抗凝血酶I、DNA结合蛋白、脂蛋白、蛋白质合成因子和酶等。通过一步亲和层析即可以获得高纯度和高产量的目标产品。

应用领域：长效重组蛋白的纯化

简介

重组蛋白药物的长效化是重组蛋白药物近年来发展的一个热点。利用化学修饰、基因工程技术等对蛋白质药物进行改造和修饰，解决了大分子蛋白质药物血液中半衰期短、给药途径单一、免疫原性和毒副反应等问题，增强了药物的活性、提高药效等。

推荐层析方法

●PEG修饰的蛋白纯化

用PEG蛋白药物可以解决许多蛋白药物面临的半衰期过短的问题。MacroCap SP和MacroCap Q设计分离PEG化蛋白和其他大分子。具有较大的孔径，平均粒径为50微米，可以在保持较高载量的同时能一步将修饰后各种杂质去除。

●HSA融合蛋白纯化

人血清白蛋白(HSA)在血清蛋白中大量存在，并且无毒性和免疫源性，这些特性使得白蛋白成为延长重组蛋白半衰期的一个良好选择

以活性蓝为配基的Capto Blue或者Blue Sepharose Fast FIow填料对HSA具有特异性的亲和力。活性蓝配基可以通过离子作用和疏水作用与目标分子结合，通过增加盐离子浓度、加入有机溶剂或者改变pH条件来进行洗脱。精细纯化可采用阴阳离子层析填料。

应用领域：寡核苷酸的纯化

简介

寡核苷酸固相合成中，杂质跟目标分子有高度的相似性，因此使用高分辨率的层析填料来纯化去除。

推荐层析方法

使用高分辨率的SOURCE系列强阴离子填料SOURCE 15Q，SOURCE 30Q搭配Fineline系列层析柱，来进行寡核苷酸的纯化

新一代琼脂糖骨架的高分辨率离子交换填料Capto Q mpRes也可以用来分离寡核苷酸，其具有更优的可放大性，适合大规模的低压层析(柱子直径大于1 m，运行压力低于3 bar)。