【Promega】pSV-b- 半乳糖苷酶对照载体和CAT Enzyme Assay System

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promega E1081 E1000

pSV-β-Galactosidase Control Vector

说明

pSV-b-Galactosidase Control Vector(pSV-b- 半乳糖苷酶对照载体 ) 是监控哺乳动物细胞转染效率的阳性对照载体。其中，SV40早期启动子 (SV40 early promoter) 和增强子驱动lacZ 基因的转录；lacZ 基因编码 b- 半乳糖苷酶。pSV-b- 半乳糖苷酶对照载体既可单独转染，也可与您的目的 DNA 共转染。b- 半乳糖苷酶是一种很好的报告基因酶，可以用分光光度法、荧光法或化学发光法快速直接地在细胞提取物中检测。使用 X-Gal 作底物，这个报告基因酶也被广泛用于原位组化分析。

pSV-b- 半乳糖苷酶对照载体可与您的目的 DNA 共转染。例如，如果将该载体与萤火虫萤光素酶基因载体 (pGL3 载体 ) 进行共转染，能够同时检测细胞提取物中的萤光素酶和 b- 半乳糖苷酶的活性。在这种情况下，pSV-b- 半乳糖苷酶载体作为瞬时表达检测的内对照。实验也应检测阴性对照提取物，用于判定细胞培养物中有无内源性 b- 半乳糖苷酶，该阴性对照提取物由假转染的细胞制备而来。

此外，共转染氯霉素乙酰转移酶报告基因载体 (pCAT® 3 载体 )，就能够检测 CAT 和 b- 半乳糖苷酶的活性。pSV-b- 半乳糖苷酶载体是由 pRSV-b-Gal 改造而来，将 SV40 和 pUC18 序列取代了 RSV 和pBR322 序列。pSV-b- 半乳糖苷酶载体可在 E. coli 内表达 pSV-b- 半乳糖苷酶，因为 lacZ 基因的上游为 E. coli gpt 启动子。带有 pSV-b-半乳糖苷酶载体的 E. coli 克隆在含有 X-Gal 的培养基上呈蓝色。

CAT Enzyme Assay System

说明

由细菌抗药基因编码的氯霉素转乙酰基酶 (chloramphenicol acetyltransferase, CAT) 通过将氯霉素的一个或两个羟基乙酰化而使其失活。在真核生物中没有发现此基因，因而真核细胞没有 CAT 活性背景。Promega 的 CAT Enzyme Assay System 可以用两种方法监控被转染细胞中 CAT 酶的活性：液闪记数法 (LSC) 和薄层层析法 (TLC)；可以对同一细胞提取物进行 LSC 或 TLC 检测。TLC 检测方法比 LSC检测方法灵敏度低且费时，但可直观地对检测结果进行确认。TLC 反应产物需要通过放射自显影或磷酸成像分析来检测。

特点

• 快速：2-3 小时内完成检测。

• 线性：LSC 检测酶活性线性范围是 3 个数量级。

• 灵敏：最低至 3x10^-4单位 (2pg) 的 CAT 可被检测。

• 耐用：报告基因裂解缓冲液允许对同一细胞提取物同时进行萤光素酶、CAT 和 b- 半乳糖苷酶的检测。