【Promega】Reporter Vector和pSP-luc+NF 融合载体

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promega E4481 E4491 E1651 E1661 E4471

Reporter Vector and Luciferase Sequencing Primers

说明

Reporter Vector( 报告基因载体，RV) 测序引物用于 pGL3 和pGL4 萤光素酶载体、Chroma-Luc™ 载体和 pCAT® 3 报告基因载体。

RVprimer3 结合在 luc+、luc2 或 CAT 基因的上游，顺时针方向对多克隆位点进行测序。RVprimer4 结合在 Promoter 和 Basic 载体的luc+、luc2 或 CAT 的多聚腺苷酸区域下游以及 Enhancer 和 Control载体 SV40 增强子下游。两种引物都可以用于双链模板的测序，但只有 RVprimer4 可以用于单链模板的测序。

GLprimer1 顺时针对 pGL2 载体萤光素酶基因克隆位点的上游进行测序。GLprimer2 逆时针对 pGL2 或 pGL3 载体萤光素酶基因克隆位点的上游进行测序。两种 GLprimers 引物都可以用于双链模板的测序，但只有 GLprimer2 可以用于单链模板的测序。

引物序列

GLprimer1: 5'-d(TGTATCTTATGGTACTGTAACTG)-3'

GLprimer2: 5'-d(CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA)-3'

RVprimer3: 5'-d(CTAGCAAAATAGGCTGTCCC)-3'

RVprimer4: 5'-d(GACGATAGTCATGCCCCGCG)-3'

储存条件：储存于 -20℃。引物以干粉形式提供。

pGL3 载体多克隆区域。图中显示了上、下游克隆位点以及测序引物 RVprimer3、GLprimer2 和 RVprimer4 结合区域。引物上的箭头表示序列的方向。由图可知，启动子(pGL3-Promoter 和 pGL3-Control 载体中有 ) 和增强子 (pGL3-Enhancer 和 pGL3-Control 载体中有 ) 区域，是在 pGL3-Basic 载体上插入了一段序列 ( 注意，启动子替换了pGL3-Basic 上的四个碱基 )。上图所示的序列是使用 f1 复制起始位点生成的 ssDNA。

pSP-luc +NF Fusion Vector

说明

pSP-luc+NF Fusion Vector (pSP-luc+NF 融合载体) 是一种盒式萤光素酶载体，含有工程化的萤火虫萤光素酶基因 luc+NF。luc+NF 基因与真核报告基因载体 pGL3 家族中的 luc+ 基因相关，但已经在萤光素酶的 N 端融合区 (NF) 进行了进一步的改进以获得最大的灵活性。在表达载体中亚克隆 luc+NF，提供了具有超常灵敏度的可遗传的报告基因。pSP-luc+ NF 融合载体本身并不是用于在真核细胞中表达萤光素酶的，因为它不包含真核启动子、增强子或多聚腺苷酸信号。

紧邻萤光素酶 ATG 翻译密码子的下游插入了一个独特的 BstEII位点，这样可以将克隆的片段插入到紧邻luc+NF 起始密码子的下游。

当融合蛋白中萤光素酶的 N 端不带有 ATG 密码子时，推荐使用该载体。

luc+NF 基因位于 SP6 启动子和核糖体结合位点的下游，另有一个反向的 T7 启动子位于 luc+NF 基因的下游。这样，pSP-luc+NF 融合载体就成为一个方便的模板，用于体外合成萤光素酶转录本的正义链和反义链，进行原位杂交、RNA 加工、RNA 转染或偶联的转录 /翻译以及蛋白折叠等方面的研究。

含常用限制性内切酶识别序列的多克隆区域位于 luc+NF 的 5' 末端及 3' 末端，以提供最大限度的克隆灵活性。用萤光素酶检测系统可对萤光素酶活性进行最有效的检测。

特点

• 灵活：多克隆位点区域位于 luc+ NF 基因的 5' 和 3' 末端，以提供最大的克隆灵活性。

• N 端与萤光素酶融合：独有的 BstEII 位点紧接着萤光素酶 ATG 翻译密码子的下游。

储存条件：储存于 -20℃。