【Promega】CYP450 Assay Systems

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CYP450 Assay Systems

萤光素检测试剂必须与上述萤光素前体底物一起使用。V8921 与 P1721, P1741, P1621,P1651 和 P1661 同时使用。V8931 必须与 P1671 和 P1731 一起使用，因为这些底物是酯的衍生物。

说明

P450-Glo™ CYP450 Assays(P450-Glo™ CYP450 检测试剂盒）为检测细胞色素 P450 酶类活性的均质的发光检测方法。这些检测试剂盒用于检测重组的和天然的 P450 酶类的活性，也可用于评估受试样品 ( 如药物或新化合物 ) 对 P450 酶类活性的影响。这些发光法检测试剂盒具有卓越的灵敏度、极低的背景信号和宽广的动态范围。

P450-GloT™ 检测试剂盒采用的 P450 发光前体底物为甲虫萤光素的衍生物。甲虫萤光素是萤光素酶的底物。未发生反应时，该衍生物不是萤光素酶的底物，然而，当 P450 酶类将该物质转换成萤光素时，即成为萤光素酶的底物，并与萤光素酶作用而发光，发光的强度与 P450 酶的活性直接呈正比。

P450-Glo™ 检测试剂盒产生“辉光型”的发光信号，该光信号由萤光素的衍生物作为 P450 酶的底物、重组的稳定化处理的萤光素酶 ( 超稳萤光素酶，Ultra-Glo™ luciferase) 以及专利的缓冲液系统共同作用产生的。发光信号的半衰期大于 2 个小时，因而不要求发光检测仪必须带有自动进样器，并可批量处理样品。当筛选细胞色素P450 酶类的抑制剂时，该系统的独特配方还可以减少由于受试样品而导致的萤光素酶活性抑制所带来的假阳性结果。

P450-Glo™ CYP3A4 Assay with Luciferin-IPA( 含 Luciferin IPA 的 P450-Glo™ CYP3A4 检测试剂盒 ) 含有细胞色素 P450 3A4的底物，特别适合于人源 CYP3A4 有关的检测，也是最适用于细胞水平检测的底物。Luciferin-IPA 可直接被细胞摄取，并可在胞内快速转变为萤光素，大大减少了实验所要求的孵育时间 ( 通常为 30-60分钟 )。使用 Luciferin-IPA 所得到的低背景和高信噪比意味着实验的原始材料可以大为减少。DMSO 是一种用于药物筛选实验的常用媒介，P450-Glo™ CYP3A4 Assay with Luciferin-PPXE 是 DMSO 耐受型检测试剂盒。

P450-Glo™ 筛选系统 (P450-Glo™ Screening Systems) 提供了使用发光方法进行细胞色素 P450 酶活性检测所需的所有试剂。该系统包括：含有重组人细胞色素 P450 酶的膜制备物、细胞色素 P450亚型所对应的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。膜制备物是从感染了杆状病毒的昆虫细胞制备而来，含有人细胞色素 P450 酶和 P450 还原酶 (CYP2C9和 CYP3A4 中还带有细胞色素 b5)。P450-Glo™ 筛选系统还包含灭活细胞色素 P450 活性的膜制备物，作为阴性对照使用。这些检测试剂盒特别适合于检测药物和新化合物对细胞色素P450酶类活性的影响。

可单独购买的萤光素前体底物可被用于检测某一特定细胞色素P450 或 NAT2 异构体的活性，这些底物的名称反映了 P450 异构体的种类。Luciferin-MultiCYP 是一个混合底物，可与至少 21 种 P450酶的异构体发生反应，在检测多种 P450 酶的混合物的净活性时很有用。Luciferin-NAT2 是 N- 乙酰基转移酶 2(NAT2) 的绝好底物，NAT2为 II 期生物转化酶，可将外源化合物中的芳香基团进行乙酰化。该底物几乎未显示出与 NAT1 的交叉反应。关于使用这些试剂的详细信息，请访问：www.promega.com/enotes/applications.htm#adme。

特点

• 试剂盒配置完备：该系统包括：含有重组人细胞色素 P450 酶的膜制备物、适合细胞色素 P450 异构的发光前体底物、NADPH再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。

• 结果可靠：动态范围宽、背景低、灵敏度高，减少了数据的不可靠性。

• 避免荧光干扰：产生的是发光信号，避免了受试化合物的荧光干扰。

• 节约时间：均质检测，" 加样 - 读数 " 模式非常简便。

• 避免假阳性结果：特别的配方降低了假阳性率。

• 节约经费：可升级至 384 孔板检测模式，降低了每个孔的成本。

• 可进行自动化检测：自动化方法已经经过确证，详情在www.promega.com/automethods/。

• 选择您自己的配置：如需了解我们的定制服务，请访问www.promega.com/myway/。

储存条件：将 CYP1A2、CYP2C9 和 CYP3A4 膜制备物储存于 -70℃。反复的冻融循环可使细胞色素 P450 丢失活性。将 CYP1A2、CYP2C9和 CYP3A4 膜制备物分装成单次用量的小份 ( 如：50µl 用于 96 个反应 )，避免多次冻融。将这些小份的膜制备物存于 -70℃。将其它所有组分储存在 -20℃或 -70℃，避光。