【Promega】DeadEnd™ Colorimetric TUNEL System

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DeadEnd™ Colorimetric TUNEL System

说明

DeadEnd™ Colorimetric TUNEL System (DeadEnd™ TUNEL比色法检测系统）是由 TUNEL 检测法改良而来，目的是简单、快速、准确地在单细胞水平下原位检测凋亡细胞。此系统可用于检测 DNA断裂，后者是细胞凋亡的重要生物学信号。该系统可以在组织切片和培养细胞中检测凋亡的细胞。DeadEnd™ Colorimetric TUNEL 系统使用改良的 TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 对凋亡细胞的断裂 DNA 进行末端标记。使用末端脱氧核苷转移酶 (TdT) 将生物素标记的核苷掺入到 DNA 的 3'-OH 末端，然后，辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素 (Streptavidin HRP) 结合在上述生物素标记的核苷上，可以通过过氧化物酶的底物、过氧化氢和稳定的显色剂氨基联苯胺 (DAB) 检测到。使用这种操作流程，凋亡细胞的核被染成深棕色。

特点

• 细胞和组织均可检测：可检测较厚的组织切片的细胞凋亡，或进行细胞形态学分析。

• 简化：系统中包含了 DAB 底物和 H2O2，以方便进行颜色检测。使用塑料盖玻片可使样品操作变得简单。

• 已经经过验证的应用范围：Vibratome® 神经组织切片，Jurkat细胞，HL-60 细胞。

• 储存条件：将平衡缓冲液，TdT 酶，生物素标记的核苷混合物和蛋白酶 K 储存于 -20℃。将链霉亲和素 HRP，DAB 20X Chromogen, 20XDAB 底物缓冲液和 20X 过氧化氢储存于 4℃。20X SSC 和塑料盖玻片室温保存。

DeadEnd™ Fluorometric TUNEL System

说明

DeadEnd™ Fluorometric TUNEL System ( DeadEnd™TUNEL 荧光法检测系统 ) 是一种传统的 TUNEL 检测法，是为在某一细胞群体中对凋亡的细胞进行检测和定量而设计的。DeadEnd™ Fluorometric TUNEL 系统检测 DNA 断裂，后者是很多细胞发生凋亡时的重要生物学信号。该检测系统无放射性，并且可以提供简单、快速、准确的方法在单细胞水平或细胞悬浮液中原位检测凋亡细胞。

检测原理：DeadEnd™ Fluorometric TUNEL 系统检测断裂的 DNA，在末端脱氧核苷转移酶 (TdT) 的作用下，依靠催化荧光素 -12-dUTP掺入到 DNA 的 3' -OH 末端来检测凋亡细胞，根据 TUNEL(TdT mediated dUTP Nick-End Labeling) 的原理，在 DNA 末端形成一个多聚尾。荧光素 -12-dUTP 标记的 DNA 可以直接由荧光显微镜观测到或者由流式细胞计数检测出。

特点

• 节约经费：该系统提供的试剂足够用于 60 个体系为 50µl 的反应。

• 节省时间：荧光标记的核苷的直接掺入减少了孵育步骤。

• 选择样品类型：可以在细胞培养物、以及经甲醛固定的、石蜡包埋的组织切片中检测凋亡的细胞。

• 方便：系统提供的塑料盖玻片简化了样品处理过程。

• 储存条件：储存于 -20℃。核苷混合物需避光储存于 -20℃。

神经祖细胞从球形的凋亡细胞团中迁移出来。浓集的细胞核(绿色)含有断裂的DNA经DeadEndFluorometric TUNEL系统显示出来，与未发生凋亡的细胞核形成对照后者较大，被DAPI染成蓝色。同时，采用BlTubulin(Cat.# G7121)的一抗和Cy3结合的二抗对细胞进行免疫细胞化学方法处理，未成熟的神经元(红色)被清楚地标记为红色。