​【Promega】基因组 DNA 的纯化

此试剂盒是基于经典的沉淀法，可从全血、组织培养细胞、动物及植物组织、酵母、革兰氏阳性及革兰氏阴性细菌中提取基因组 DNA，纯化方法简单、快速。

操作过程也是经典的4步。首先是裂解细胞和细胞核。对于全血的 DNA 提取，这一步则包括裂解红细胞，接着裂解白细胞和细胞核。如果需要在这一步可加入 RNase 消化。接着通过盐沉淀步骤去除胞内蛋白。之后，通过异丙醇沉淀浓缩基因组 DNA，并通过乙醇洗涤。纯化得到的 DNA 可用于扩增反应、限制性酶切消化和膜杂交等多种应

用。

这一试剂盒能够胜任多种材料，对样品的起始量要求也很广。以全血为例，低至50，高至 10m 都 OK。因此，的确是实验室的不错选择。价格方面，500 次(每次 300m全血)试剂盒的价格为2,742 元，单次不到 5.5 元。

采用Wizard®基因组DNA纯化试剂盒从不同起始材料中纯化DNA的产量如下:

此系统可从多种天然和加工食物中纯化出DNA，包括谷物种子、谷物粉、大豆、大豆粉和豆奶、薯片、巧克力及含巧克力的食品、蛋黄和植物油等。从这些样品中纯化出的 DNA 可用于转基因作物(GMO)的序列测定。

纯化过程使用了MagneSil顺磁性颗粒，仅需极少的离心，也不需有机溶剂抽提，快速简便，仅用常规方法 113 的时间即可完成。此试剂盒的价格为 13,203 元1400 次。

除了这两个经典产品，Promega 近几年也推出了不少新产品，可满足你的“三高”要求--纯度高、产量高、通量高。生物通将按照样品类型介绍。

我们都知道，若 DNA 样品有酒精残留，可能会抑制下游的酶解反应。为解决这一问题Promega推出了ReliaPrep™ 组织基组 DNA小提系统。它提供了完整即用的方法,可从高达25mg组织、1 个口腔拭子、或 1cm 的剪断鼠尾中纯化得到高纯度的 gDNA。整个操作过程仅需 30 分钟或更短，无需酒精洗涤或沉淀即可得到完整的gDNA，适合基因分型、芯片和测序等苛刻应用。这个试剂盒采用的是柱提法，也是简单的4步。首先破碎起始材料，释放 DNA;然后让DNA与 ReliaPrepm结合柱结合;利用洗涤液去除杂质:最后是洗脱。不过此洗涤液不同于以往的 70%乙醇，也就避免了乙醇残留所带来的问题。此外，系统中的试剂都以即用型提供，无需添加或配制。

Promega提供了ReliaPrepr、Wizard以及Maxwell®16三个系列的gDNA纯化试剂盒，能够从哪怕最具挑战性的血液样品中提取基因组DNA。前面提到的经典产品Wizara基因组DNA纯化试剂盒就能从 50 ul-10 ml全血中提取gDNA.若血液量较少，你还可以试试ReliaPrep™血液基因组 DNA 小提系统。它的特点同上，无需精洗涤，即可从多达200m 血液或体液中始终如一地提取到纯净的完整基因组 DNA。基因组 DNA 可以从新鲜的或冷冻的血液中制备，在不到40 分钟内可得到 4-10ug 的预期 DNA产量，当然这取决于血液样品中的白细胞数目。

若血液量较多，ReliaPrep™大容量高通量9DNA提取系统则更为合适。它能以规格可调的模式从 3-10ml血样中提取基因组DNA。该方法无需繁琐的离心步骤，也无需使用有毒试剂，而这些是沉淀提取法所固有的。ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统已在Hamilton Robotics MICROLAB:STARplus液体处理工作站中实现自动化，可以一次性处理 96 个样品。对于一次最多32个样品的低通量gDNA提取，可以使用ReliaPrep™ 32 LV HSM的手动模式，由用户手动进行移液。

上面介绍的这些产品大部分采用手动操作来提取gDNA。随着人们对速度、质量的要求不断提高，有些实验室也开始尝试使用自动化的纯化系统。Maxwell@16 仪器便是Promega公司近年来推出的一款纯化仪。

Maxwell®16 仪器可自动纯化高质量DNA、RNA、病毒总核酸和重组蛋白，均衡性好，省时省力，可满足多种下游应用。纯化的介质为顺磁性颗粒，能够实现对目标分子的最佳捕获、洗涤以及洗脱。与传统的硅胶膜方法相比，磁珠带来了更高的结合量和更干净的洗脱。将样品或样品裂解物直接加入预先装有试剂的试剂筒内，即可按“开始”键，启动纯化程序。试剂盒与自动纯化程序均经过优化，能够从特定样品中纯化出最高质量的目标用于下游实验。

Maxwell®16 自动纯化仪有两种配置可供选购:用于得到最大产量的SEV(Standard Elution Volume,标准洗脱体积，200-400ul)，和用于得到最高浓度的LEV(Low Elution Volume,低洗脱体积，30-100u)。此外，SEV和LEV仪器均可配置Flexi Method 固件，用户可以自行构建Maxwell®16 自动纯化仪的程序，做进一步的性能优化。

Maxwell®16 自动纯化仪预置有纯化程序，试剂盒内有预先装有各步骤试剂的条形试剂筒，这些程序与试剂盒最大限度地增加了操作的简便程度。在 18-50 分钟内(取决于样品的类型)，该自动纯化仪可处理 1-16 个样品。有了Maxwell®16，你就可以有更多时间去完成其他更具创造性的工作。目前，Promega提供了以下试剂盒，可用于Maxwell®16 自动纯化仪。