【Promega】HaloTag® Mammalian Pull-Down System
产品描述
HaloTag® Mammalian Pull-Down System用于分离和鉴别哺乳动物细胞内蛋白复合物。HaloTag® 融合蛋白可与HaloLink™ Resin形成高特异性共价键，因此即使当诱饵蛋白表达水平极低（内源性水平）时，也可快速、有效地捕获蛋白复合物。鉴于 HaloTag® Mammalian Pull-Down System 具有这些优点且HaloLink™ Resin发生非特异性结合的可能性较低，因此在哺乳动物细胞中捕获蛋白复合物和识别具有生理意义的蛋白相互作用的成功率较高。
HaloTag® Mammalian Pull-Down and Labeling System 还 随附提供 HaloTag®™ RDirect™ Ligand，该配体可实现蛋白表达水平的优化，使用相同 HaloTag® 基因构建体研究细胞定位、转运和蛋白转换。
原理
HaloTag pull-down System的基本实验方案如图6.7 所示。HaloTag 融合蛋白可于哺乳动物细胞进行瞬时或稳定表达，且可用作捕获相互作用蛋白或蛋白复合物的诱饵蛋白。细胞裂解后，HaloTag融合蛋白与其相互作用蛋自伴侣发生结合，并被HaloLink™ Resin 捕获。使用 SDS 洗脱缓冲液(或8M 尿素等其他变性条件)轻轻洗涤并洗脱捕获的蛋白复合物，或使用 TEV 蛋白酶*切下树脂上蛋白复合物。可采用多种方法(包括蛋自印迹分析法和质谱法)对回收的蛋自复合物进行分析。
功能和优点
• 捕获量增加：HaloTag® 蛋白可快速与树脂发生共价结合，因此蛋白伴侣（包括瞬时相互作用蛋白）捕获量增加。
• 兼容性：与所有下游分析方法（包括质谱法）的兼容性良好。
• 可对 HaloTag® 融合蛋白进行荧光标记：优化蛋白表达水平并实现细胞蛋白定位。
其他信息
* 也可单独购买 TEV 蛋白酶。
参考文件
Galbraith, M.D. et al. (2013) HIF1A Employs CDK8-Mediator to Stimulate RNAPII Elongation in Response to Hypoxia.Cell 153(6), 1327-39.
Kalashnikova, A. et al. (2013) Linker histone H1.0 interacts with an extensive network of proteins found in the nucleolus. Nucl. Acids Res. 41(7) 4026-35.
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