【Promega】ProTEV Plus 蛋白酶和 HPLC应用
ProTEV Plus 蛋白酶
从融合蛋白中切除亲和标签
ProTEV Plus 是来自烟草蚀纹病毒（TEV）的 Nla 蛋白酶进行基因工程改造后的 48kD 蛋白酶，比天然的 TEV 蛋白酶酶活更长从而更稳定。它是一个高度特异的蛋白水解酶，在一个七氨基酸序列内部进行切割（ENLYFQ(G/S)）。ProTEV Plus 在宽广的pH（5.5-8.5）和温度（4-30 ℃）范围内均有活性。可在理想的切割位点对改造后含有上述七氨基酸序列的融合蛋白进行切割。
该酶在溶液中和柱上均可使用。ProTEV Plus 蛋白的 N 末端还具有 1 个 HQ 标签（类似于 His 标签），使其可固定在 Ni 亲和树脂上，并可从切割反应中去除。
应用
• 在蛋白纯化后，从融合蛋白中切除亲和标签
• 在感兴趣的融合蛋白进行蛋白纯化 / 表达时，移除HaloTag® 蛋白
特点
• 在宽广的 pH 和温度范围内都有活性：用最适条件切割每个融合蛋白，从而使其保持活力和正确构型。
• HQ 标签：切割反应后，可使用基于镍的亲和树脂来方便地去除 ProTEV Plus 。
• 在溶液中直接切割融合蛋白或用亲和树脂固定：ProTEV Plus 在多种实验中都很方便易用。
Factor Xa 蛋白酶
Factor Xa Protease（Xa 因子蛋白酶）从小牛血浆中纯化得到，经过 Russell 蛇毒来源的酶激活处理。Xa 因子蛋白酶的切割识别位点是 Ile-Glu-Gly-Arg 的羧基末端。
应用
切割含有 Factor Xa 蛋白酶位点的蛋白和融合蛋白。
HPLC 应用
异天冬氨酸检测
ISOQUANT® Isoaspartate Detection Kit (ISOQUANT® 异天冬氨酸检测试剂盒 ) 用于定量检测蛋白及多肽中异天冬氨酸残留，如单克隆抗体。这种残留可来源于天冬酰胺酸逐步的非酶化的脱酰胺作用，或者天冬氨酸残留物在储存或处理过程中发生重排。
由于本试剂盒不是对电荷的改变量进行监测，因此电荷的不均一性不会影响分析。
特点
• 高效：程序简单，反应在 1 小时内可完成。可使用 HPLC进行自动样本处理。
• 经济：HPLC 检测 , 既节省成本，又免除了对放射性原料处理的麻烦。
• 易分析：能够提供定量结果。
• 用途广泛：既可单样本处理，也可批量处理。小型样本使分析结果适用于分析研究的方法、试剂配方及流程的改进工作。
• 稳定：不受缓冲液成分的影响。
• HPLC 检测方法：适用于现有的仪器与技术。
• 灵敏：检测由于天冬氨酸重排及脱酰胺作用产生的异天冬氨酸。
上图 . SAH 标准品和 Isoasp-DSIP 参照物反应的 RP-HPLC 色谱图
图 A. 50pmol SAH 标准品。
图 B. 10pmol Isoasp-DSIP 参照物。根据标准操作流程制备和 RP-HPLC 分析样本。样本以 1ml/min 的速度自动注射入仪器。以 10% HPLC 级流动相 B 洗脱，再以 30% 流动相 B 洗脱，然后再注射下一个样本前以 10% 流动相 B 平衡柱子。
色谱图显示 260nm 处有峰。
应用文献
• Isoaspartate-glycine-arginine: A new tumor vasculature-targeting motif. 2008 Cancer Res. 68, 7073–82.
• Accumulation of proteins bearing atypical isoaspartyl residues in livers of alcohol-fed rats is prevented by betaine administration: effects on protein-L-isoaspartyl methyltransferase activity. 2007J. Hepatol. 46, 1119–25.
• Identification of deamidation and isomerization sites on pharmaceutical recombinant antibody using H218O. 2007 Anal. Biochem. 368, 49–60.
• Proteomic identification of novel substrates of a protein isoaspartyl methyltransferase repair enzyme.2006 J. Biol.Chem. 281, 32619–29.
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