【Promega】蛋白酶相关产品
蛋白质通常用蛋白酶消化产生多肽，用于质谱分析，然后进行测序（串联质谱）。Promega 提供一系列适合质谱样品制备的蛋白酶。在质谱中用于蛋白质最佳消化的可用蛋白酶包括胰蛋白酶 (Trypsin)、Trypsin/Lys-C、rLys-C、Lys-C、rAsp-N 等。同时也提供 ProteaseMAX™ 表面活性剂用于改善胶内消化蛋白质和蛋白质溶解。
ProAlanase
▍▏蛋白质组学研究中最新可选蛋白酶
ProAlanase 是一种内切蛋白酶，优先切割蛋白质中脯氨酸羧基端，在较小程度上切割丙氨酸。从黑曲霉 (Aspergillus niger) 中分离纯化的 ProAlanase 也被称为 An-PEP 或 EndoPro。用 ProAlanase 消化蛋白质得到的多肽适合于质谱鉴定和表征分析。
用胰蛋白酶消化通常会产生不完整的序列覆盖或翻译后修饰的缺失鉴定。与胰蛋白酶一样，其他蛋白酶如 Lys-C、Asp-N、Glu-C 和 Arg-C 也会在带电荷的残基上裂解，从而使蛋白质中被消化的区域产生偏向。最新的解决方案是 ProAlanase ，它在蛋白质组中独特的、非带电的位点上裂解。
▍▏产品列表
▍▏特点
• 新的位点特异性内切蛋白酶，酶切靶点为脯氨酸和丙氨酸。
• 在酸性 pH（1–5.5）下具有活性，最适 pH 约为 1.5。
• 消化时间短，只需消化 1-2 小时。
上图:人 K562提取物在pH值1.5,37℃下用 ProAlanase 消化2小时,使用 1:100酶:底物比。进行 LC-MS /MS 分析后，以 Byonic™ 软件进行数据分析。切割主要发生在脯氨酸和丙氨酸的羧基端。
▍▏消化时间短，性能更佳
对于 ProAlanase, 短时间的消化能达到最佳的消化效率和特异性。
较长的消化时间会导致特异性丧失（左图），而消化效率也无明显提高（右图）。
Trypsin Platinum, Mass Spectrometry Grade
Trypsin Platinum 是一种重组的胰蛋白酶，旨在通过质谱和反相高效液相色谱紫外检测（RP-HPLC-UV）对蛋白质进行准确表征鉴定。它没有任何可检测到的非特异性蛋白水解活性。新的化学修饰方法确保其具有最大程度的自水解抵抗。Trypsin Platinum 具有较高的蛋白水解效率，不含动物源性污染蛋白。
▍▏特点
• 重组胰蛋白酶，具有最高的消化灵敏度。
• 最大程度抵抗自水解。
• 每批通过质谱鉴定，以确保与您的应用 / 仪器兼容。
• 无非特异性裂解活性的重组蛋白酶。
图1 Trypsin Platinum 切割特异性
1. Trypsin Platinum 和其他品牌胰酶的非特异性蛋白水解活性比较。以 Panitumumab (Vectibix®) 作为模型蛋白底物。消化反应的胰酶 : 蛋白比为 1:10。消化的肽以 RP-HPLC-UV 进行分析。用 LC-MS 对肽峰进行分配，以区分特异性切割和非特异性切割。图 A. 数据表明，来自其他品牌的质谱级胰蛋白酶具有显著的非特异性蛋白水解活性。图 B. Trypsin Platinum 仅产生特异性胰酶酶切。
图 2. Trypsin Platinum 的自水解抵抗
图 2 . Trypsin Platinum 和其他品牌胰酶的自水解活性比较。用常规消化条件孵育品牌 S 的胰酶和 Trypsin Platinum。具体条件为胰酶以100mM Tris-HCl (pH 8)/2mM CaCl2 的溶液重悬，并在 37℃孵育过夜。自水解产物以 RP-HPLC-UV 分析。新鲜的，未孵育的胰酶作为对照进行分析。比较图 A和图 B，图 A 中品牌 S 的胰酶 (Proteomic grade trypsin ) 可见显著的自水解，而图 B 中 Trypsin Platinum 的自水解已低到可忽略的水平。
Promega 质谱分析用胰蛋白酶的质量标准样品制备特性和反应条件指南
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