【Promega】Lumit™ Immunoassay Cellular Systems
Lumit™ Immunoassay Cellular Systems
描述和应用
多项研究证实，Lumit Immunoassay Celular Systems 可用于细胞中的激酶信号通路分析。检测试剂盒包含裂解缓冲液、一组预先标记的 Lumit 二抗以及检测试剂。在联合使用相匹配的一对一抗(试剂盒未提供)时，该免疫检测系统可轻松实现信号通路分析。如下文所述内容，对于可用的不同靶标和通路，提供了数量越来越多的相关应用说明。每个应用说明均提供了操作步骤以及所用一抗的信息。
原理和工作流程
Lumit™ Immunoassay Cellular Systems 使用间接 Lumit 检测模式，其将两种一抗与预先标记 LqBiT或 SmBiT 亚基的两种匹配二抗进行混合。目前为止，经多项研究证实，这种检测模式可用于细胞裂解物中的细胞信号传导分析，特别是因磷酸化介导的信号传导。实验工作流程第(1)步为对细胞进行相应处理从而激活目标信号通路。此时，如果需要使用活细胞数量对结果进行归一化处理，则可应用提供的细胞活性荧光底物。(2)加入洋地黄皂苷裂解缓冲液，从而在孔内裂解细胞。(3)加入抗体混合物(-抗和 Lumit™ 二抗)和(4)在室温条件下孵育 60 至 90 分钟后，再加入 Lumit™ 检测试剂来测定检测系统中的发光信号。
代表数据
NFKB 信号通路内磷酸化和总蛋白的检测
以 50000个/孔接种 MCF-7细胞，然后用 TNF-α(20ng/ml)处理 30分钟从而诱导NFKB 通路。IKK复合物特异性抑制剂IKK16(10μM，1小时)对特异性对照孔中的细胞进行预处理。随后，使用两组一抗在单独的孔中测定(A)磷酸化 IBα(S32)或(B)总 lkBα 水平。
发光信号数据归一化为每孔活细胞数量
使用 50ng/m TNF-α 对不同数量的细胞处理 30 分钟。(A)裂解前 30 分钟，向所有细胞中加入细胞活性荧光底物 GF-AFC。本检测系统的检测原理基于活细胞内的活细胞蛋白酶对 GF-AFC 的蛋白水解作用，从而形成荧光产物。细胞裂解后，加入抗体混合物从而对总IKBα 进行检测。(B)实验结束时读取发光信号和荧光信号。将Lumit™ 免疫检测数据归一化为细胞活性可很容易消除细胞数量的孔间差异造成的影响。
预验证目标
提供了预验证目标的应用说明列表，以节省检测时间和人力。应用说明包含靶标特异性操作步骤、代表性数据以及使用的市售抗体信息。
请访问 Promega 微网站查看以上列出的靶点对应的中文应用说明。
wechat.promega.com.cn.
请访问 Promega 官方网站浏览最新的应用说明。
www.promega.com/LumitCellularSystems
Product Box
点在看，传递你的品味
