【Miltenyi】间标磁珠资料

MACS磁珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于在高强度、梯度磁场中对细胞磁性分离。

1.直径仅有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一。

2.MACS磁珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。

3.MACS磁珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性;磁性标记只占用20 - 30%的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。

4.MACS磁珠可以最大限度地避免细胞活化，无需解离磁珠，可以直接进行后续实验，如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究或者体内回输。

5.德国美天旎是最早研发磁珠分选的公司，其中CD34磁珠是临床细胞治疗中唯一可以使用的磁珠。

间标磁珠

直标磁珠

多选磁珠

1.适用物种更广

几乎可以分选任何物种的任意类型的细胞；

2.放大信号

间接标记有放大作用，可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用间标磁珠，相比于直标磁珠、得到的细胞纯度和得率都会更高；

3.节省成本

当您需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞时，您可以使用不同的美天旋一抗、搭配同一种间标磁珠，大大节省成本!

4.完美搭配、效果更佳

美天旎的二抗磁珠搭配美天旎的一抗产品，能够得到更高纯度和得率的目的细胞。

此类磁珠上耦联了荧光素，如PE、APC、Cy5、Cy7和FITC等。配合解离磁珠的Multisort Kit可以实现分选后磁珠的解离。

我们推荐您使用130-097-054，PE荧光最强，PE磁珠(干粉)得到的细胞纯度和得率最高，稳定性也更好

Fig.1 从人PBMC中分选CMV特异性T细胞，用PE标记的CMVpp65/A2四聚体标记CMV特异性T细胞，再用抗PE磁珠将其从PBMC中阳性分选出来。

抗荧光素间标磁珠优点:

（1）磁珠只和荧光素结合，特异性更强，美天旎磁珠搭配美天旎流式抗体分选效果最佳!

（2）分选完直接可以进行流式细胞仪上机检测或者二次分选，无需再进行标记;

（3）美天旎专利 REAfinity流式抗体(重组基因工程改造抗体)避免非特异结合、更好的分选目的细胞。

REAfinity流式抗体特点:

特点一：几乎不与Fc受体产生非特异性结合

Fig.2 用PE标记的鼠源单抗(A、B)、REAfinity抗体(C)检测人PBMC中的CD158a表达，同时标记CD56-FITC抗体，用MACSQuant流式细胞仪检测。鼠源单抗标记前分别不加(A)/加(B)FCR封闭剂处理REAfinity抗体组(C)无需封闭步骤。

特点二:更好的特异性、更高的亲和力

Fig.3 REA154流式抗体检测小鼠Dectin-1阳性细胞。用联PE的REAfinity抗体(A)和鼠源单抗(B)检测BALB/c小鼠骨髓细胞中Dectin-1的表达，同时标记CD11b-APC抗体(#130-102-493)，用MACSQuant流式细胞仪检测。分析前已通过散射光和PI染色设门排除了细胞碎片和死细胞的干扰。

特点三:纯度更高、批次差异更小

Fig.4 质谱分析鼠源单抗和REAfinity抗体。鼠源单抗(上图)是包含免疫球蛋白重链和轻链的混合物，而REAfinity单抗(下图)仅含一种重链( 50kDa)和一种轻链 (24kDa )。

抗生物素磁珠和链霉亲和素磁珠均可以捕获生物素耦联的一抗所结合的细胞、生物大分子等，区别在于:前者只识别联了抗体和细胞的生物素，不会结合溶液中游离的生物素，而后者会识别游离生物素。因此，如果待分选细胞悬液中存在游离生物素，最好选择抗生物素磁珠。

适用于分选无荧光素标记一抗所标记的细胞，如AntiMouse IgM MicroBeads可用于分选小鼠IgM型一抗识别的细胞。

Fig.5 用CD16(mouse IgM型)一抗来标记人外周血淋巴细胞，然后用Anti-Mouse IgM MicroBeads进行阳性分选。

1.免疫磁珠细胞分选方法可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞；10⁹细胞仅需要30分钟即可。

2.对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养

3.对操作人员要求低，使用简单的磁铁就可以进行细胞的分选工作，易于开展实验研究

4.结合间标磁珠配合相关的流式抗体，后续开展实验的成本更低。效率更高。

从正常外周血PBMC分选Treg细胞( cd4+cd25+cd127dim )，正常人Treg含量1-4%。

1. 纯磁珠法分离:直接使用CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit,可以在2个小时左右时间分选得到目的细胞。

出发点 : 活性第一( 活性95%以上)，纯度第二( 理论纯度96%以上)

（相关文献）纯磁珠法分离

( 1) Hong et al.(2006) Proc. Natl.Acad.Sci. U.S.A, 103: 5024-5029.

( 2 ) Mougiakakos, D. et al.(2009) Naturally occurring regulatory T cells show reduced sensitivity toward oxidative stress-induced cell death.

Bllood 113:3542-3545

2.流式分选:使用传统流式抗体分选(REA基因工程抗体)，可以得到较高纯度的自的细胞

出发点:纯度第一，活性第二，理论纯度:99%以上或者更高。

(相关文献)流式分选

Kurian, L. et al. (2013) Conversion of human fibroblasts to angioblast-like progenitor cells. Nat. Methods 10(1): 77-83

3.磁珠+流式分选:同时兼顾纯度和活性，可以实现多重指标的分选，把磁珠分选和流式分选优点发挥到极致。

(相关文献)磁珠+流式:

Lucia Ricci-Vitiani et al.(2007) Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells.Nature 445,111-115

可以用cd4、cd25、cd127抗体进行预先标记，使用anti cd 4荧光的磁珠分选完以后，直接上流式细胞仪进行二次分选。特别说明，磁珠不影响细胞活性及功能、不容易堵塞流式细胞仪。相关引用文献如需要可以向我们索取。

流式分选和磁珠分选互不冲突，互补是最好的搭配

纯度是指目的靶细胞占所有细胞的百分比，而不是占门百分比。例如:分选cd4+目的细胞，其纯度计算是以cd4+为横坐标参数轴，ssc物理参数轴计算阳性细胞的百分比。

一、MiniMACS™ 和MidiMACS™ 分选器 -分选不可或缺

二、OctoMACS™ Separator - 用于多个样品同时分选

OctoMACS Starting Kit

(130-042-108)

1 OctoMACS™ Separation Unit 1 MACS MultiStand; 25 MS Columns可选择一款MACS分选试剂*

三、QuadroMACS™Separator -用于多个样品同时分选

QuadroMACS Starting Kit

(130-091-051)

1 QuadroMACS™ Separation Unit; 1 MACS MultiStand; 25 LS Columns 1 MACS 15 mL Tube Rack 可选择一款MACS分选试剂*