【Merck】Amicon® Pro微量蛋白快速纯化方法

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Merck ACS500024 69704 A7345 69025 A1970 C7901 T0637 C9142 C4650 A25120 I4507 4B200

蛋白纯化常常包括很多步骤，用到多种器具，却又因此带来蛋白降解、吸附、转移损失的问题。为了避免因样品多次转移带来的各种风险，减少在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间，默克生命科学创新地推出了Amicon® Pro一体化纯化超滤管。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作，使纯化浓缩蛋白变得简便高效，数据易得且稳定。

• 高产-单管操作，没有样品转移，损失降到最少

•蛋白活性高-特别的渗滤设计使换液过程更温和

•省时省力-从细胞裂解到纯化、浓缩/换液，一共仅需要6次低速离心

•灵活-一个装置的简单离心操作，即可全面支持各种样品制备所需

• 亲和纯化并浓缩：用于纯化GST•Tag，His•Tag等重组表达蛋白及抗体，适合～0.5 mL裂解液操作~6次低速离心，总耗时~100分钟（已含65分钟孵育时间）

• 脱盐/缓冲液置换并浓缩

5次低速离心，总耗时~35分钟

• 抗体/蛋白标记

5次低速离心，总耗时~50分钟

产品描述	特点	包装	目录号
Amicon® Pro 24Pack	2mg 以内蛋白的快速纯化 - 换液 - 浓缩，搭配AU0.5 超滤管使用	24 个	ACS500024

下面介绍用Amicon® Pro纯化浓缩管纯化蛋白的操作方法：

需要的试剂及设备

• Amicon® Pro纯化浓缩管（货号ACS500024）

• 含目标蛋白的样品

•纯化树脂（根据纯化蛋白的融合标签选择，也可以是Protein A等抗体纯化树脂）

•离心机

操作指南

Amicon® Pro开放式设计使其有多样性应用。已经建立小量蛋白样品纯化-换液/除盐-浓缩标准操作流程。用于纯化GST•Tag、His•Tag等重组表达蛋白及抗体，适合～0.5mL裂解液操作。

1. 在Amicon® Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂（50%悬浊液）和1.5mL漂洗缓冲液。1,000g离心1min。

2. 加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h，其间可温和搅动促进结合。

3. 1,000g离心1min以去除未结合杂质。

4. 加入1.5mL漂洗缓冲液，1,000g离心1min。

5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。

6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。

7. 4,000g离心15min。

如果是抗体纯化，5-7步微调成以下操作

5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（可选用50kDa型号）。

6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀，4,000g离心5min。

7. 加入200µL中和缓冲液，4,000g离心15min。

8. 加上蛋白样品最终需要的缓冲液1.5mL。4,000g离心15min，置换缓冲液的同时进行浓缩。

9. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管，1,000g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。

其它常用蛋白纯化相关产品

除了前述提及的各种常用融合标签，实践中S、V5、T7等也在特定应用中有独特的用途，对应的亲和纯化方法也已经建立。而蛋白和大分子的精制纯化方法很多，除了特异性很高的亲和纯化，还可以选择相对经济的离子交换或分子筛色谱法进行纯化。默克生命科学集合了Sigma、Millipore品牌提供了广泛的选择。

类型	产品描述	包装	目录号
S 融合蛋白	S-protein Agarose	2mL, 10mL	69704
V5 融合蛋白	Anti-V5 Agarose Affinity Gel antibody produced in mouse	1mL	A7345
T7 融合蛋白	T7˙Tag® Affinity Purification kit	1个	69025
VSV-G融合蛋白	Anti-VSV-Glycoprotein Agarose antibody, Mouse monoclonal	-	A1970
其它常用蛋白纯化产品	Chelex® 100 sodium form	25g, 50g, 100g, 500g	C7901
	Trypsin inhibitor–Agarose	5mL, 10mL, 25mL	T0637
	Cyanogen bromide-activated-Sepharose® 4B	1g, 5g, 15g	C9142
	Cholestyramine resin	25g, 100g, 250g	C4650
	DEAE–Sephadex® A-25 chloride form	10g, 50g, 100g, 500g	A25120
	2-Iminobiotin-Agarose	5mL	I4507
	Sepharose® 4B	100mL, 500mL, 1L	4B200