【Merck】Amicon® Pro微量蛋白快速纯化方法
蛋白纯化常常包括很多步骤,用到多种器具,却又因此带来蛋白降解、吸附、转移损失的问题。为了避免因样品多次转移带来的各种风险,减少在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间,默克生命科学创新地推出了Amicon® Pro一体化纯化超滤管。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作,使纯化浓缩蛋白变得简便高效,数据易得且稳定。
• 高产-单管操作,没有样品转移,损失降到最少
•蛋白活性高-特别的渗滤设计使换液过程更温和
•省时省力-从细胞裂解到纯化、浓缩/换液,一共仅需要6次低速离心
•灵活-一个装置的简单离心操作,即可全面支持各种样品制备所需
• 亲和纯化并浓缩:用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作~6次低速离心,总耗时~100分钟(已含65分钟孵育时间)
• 脱盐/缓冲液置换并浓缩
5次低速离心,总耗时~35分钟
• 抗体/蛋白标记
5次低速离心,总耗时~50分钟
产品描述 | 特点 | 包装 | 目录号 |
Amicon® Pro 24Pack | 2mg 以内蛋白的快速纯化 - 换液 - 浓缩,搭配AU0.5 超滤管使用 | 24 个 | ACS500024 |
下面介绍用Amicon® Pro纯化浓缩管纯化蛋白的操作方法:
需要的试剂及设备
• Amicon® Pro纯化浓缩管(货号ACS500024)
• 含目标蛋白的样品
•纯化树脂(根据纯化蛋白的融合标签选择,也可以是Protein A等抗体纯化树脂)
•离心机
操作指南
Amicon® Pro开放式设计使其有多样性应用。已经建立小量蛋白样品纯化-换液/除盐-浓缩标准操作流程。用于纯化GST•Tag、His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5mL裂解液操作。
1. 在Amicon® Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5mL漂洗缓冲液。1,000g离心1min。
2. 加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000g离心1min以去除未结合杂质。
4. 加入1.5mL漂洗缓冲液,1,000g离心1min。
5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。
7. 4,000g离心15min。
如果是抗体纯化,5-7步微调成以下操作
5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(可选用50kDa型号)。
6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀,4,000g离心5min。
7. 加入200µL中和缓冲液,4,000g离心15min。
8. 加上蛋白样品最终需要的缓冲液1.5mL。4,000g离心15min,置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管,1,000g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
其它常用蛋白纯化相关产品
除了前述提及的各种常用融合标签,实践中S、V5、T7等也在特定应用中有独特的用途,对应的亲和纯化方法也已经建立。而蛋白和大分子的精制纯化方法很多,除了特异性很高的亲和纯化,还可以选择相对经济的离子交换或分子筛色谱法进行纯化。默克生命科学集合了Sigma、Millipore品牌提供了广泛的选择。
类型 | 产品描述 | 包装 | 目录号 |
S 融合蛋白 | S-protein Agarose | 2mL, 10mL | 69704 |
V5 融合蛋白 | Anti-V5 Agarose Affinity Gel antibody produced in mouse | 1mL | A7345 |
T7 融合蛋白 | T7˙Tag® Affinity Purification kit | 1个 | 69025 |
VSV-G融合蛋白 | Anti-VSV-Glycoprotein Agarose antibody, Mouse monoclonal | - | A1970 |
其它常用蛋白纯化产品 | Chelex® 100 sodium form | 25g, 50g, 100g, 500g | C7901 |
Trypsin inhibitor–Agarose | 5mL, 10mL, 25mL | T0637 | |
Cyanogen bromide-activated-Sepharose® 4B | 1g, 5g, 15g | C9142 | |
Cholestyramine resin | 25g, 100g, 250g | C4650 | |
DEAE–Sephadex® A-25 chloride form | 10g, 50g, 100g, 500g | A25120 | |
2-Iminobiotin-Agarose | 5mL | I4507 | |
Sepharose® 4B | 100mL, 500mL, 1L | 4B200 |
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