【Merck】抗体亲和纯化
微生物来源的Protein A 和Protein G 对于哺乳动物免疫球蛋白(Ig) 有着特异性结合能力，依抗体亚型不同结合力有所不同。这两种蛋白包被到琼脂糖上固定化后，就成为抗体纯化和免疫沉淀（IP）极为方便的操作工具。
• Protein A：每个蛋白分子有5个Fc结合域，对兔、豚鼠、猪、狗、猫多克隆IgG有较强结合力
• Protein G：每个蛋白分子有2个Fc结合域，对小鼠IgG1、人IgG3、大鼠、山羊、牛结合力优于Protein A；不与人IgA、IgD、IgM
• 混合结合Protein A和G：具备所有Protein A和Protein G对于抗体种属和亚类的结合能力，是一种方便的通用解决方案
下面介绍Protein A琼脂糖亲和纯化抗体的操作方法：
Protein G的操作方法也类似，具体可以参考（货号16-266）的说明书
需要的试剂及设备
• Protein A Fast Flow琼脂糖（货号16-156）
• 含有抗体的样品
• TBS缓冲液，甘氨酸缓冲液，抗体中和缓冲液
• 叠氮化钠或硫柳汞
• 0.45μm滤器
• 色谱柱
•分光光度计
操作指南
1. 用0.45μm滤器过滤所有缓冲液。
2. 纯化前对所有缓冲液做脱气处理。
3. 将Protein A Fast Flow琼脂糖（货号16-156）加到的固定好的空柱子里，按柱子厂家相关说明操作。
4. 用10-20倍柱体积的Tris缓冲盐溶液pH7.4（TBS）漂洗并平衡沉降好的protein A琼脂糖柱床，流速为1mL/min。
5. 将含IgG的样品上柱。
6. 用10-20柱床体积的TBS洗柱，去除未结合和非特异性结合蛋白。可以借助在线UV检测器测280nm吸收值来确定漂洗的效果。也可以收集流出液再检测其中的蛋白。
7. 用10mL 50mM甘氨酸pH 2.7洗脱结合的IgG，按1mL/管收集到预装了抗体中和缓冲液（1M Tris, pH8.0, 1.5M NaCl, 1mM EDTA）的试管中。经洗脱的IgG可在280nm测吸光值来鉴定。
8. 用10-20柱体积TBS洗柱至中性pH以使柱子再生。
9. 将柱子存放于TBS中，其中含0.02%叠氮化钠或0.01%柳硫汞。
默克生命科学提供全套的Protein A/G产品:
类型 | 产品描述 | 包装 | 目录号 |
Protein G | Protein G Agarose | 5mL | 11243233001 |
高流速Protein G | Protein G Agarose, Fast Flow | 10mL | 16-266 |
Protein G Sepharose®, Fast Flow | 1mL, 5mL | P3296 | |
Protein G磁珠 | PureProteome™ Protein G Magnetic Beads | 2×1mL | LSKMAGG02 |
Protein A | Protein A Agarose | 5mL | 11134515001 |
红色Protein A | EZview™ Red Protein A Affinity Gel | 1mL, 5×1mL | P6486 |
高流速Protein A | Protein A Agarose, Fast Flow | 10mL | 16-156 |
Protein A–Agarose Fast Flow | 1mL, 5mL | P3476 | |
Protein A-Sepharose® 4B, Fast Flow from Staphylococcus aureus | 1mL, 5mL | P9424 | |
Protein A磁珠 | PureProteome™ Protein A Magnetic Beads | 2×1mL | LSKMAGA02 |
Protein A/G | Protein G Plus/Protein A-Agarose | 10mL | IP10 |
Protein A/G 磁珠 | PureProteome™ Protein A/G Mix Magnetic Beads | 2×1mL | LSKMAGAG02 |
抗体片段纯化磁珠 | PureProteome™ Kappa Ig Binder Magnetic Beads | 2×1mL | LSKMAGKP02 |
PureProteome™ Lambda Ig Binder Magnetic Beads | 2×1mL | LSKMAGLM02 |
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