【Merck】抗体的保存指南
正确进行抗体的保存对其功能和使用期限极为重要。正确保存的抗体可在较长时间内不发生降解,有效性可延长至几个月甚至几年。相反,未正确保存的抗体可在几个小时内变性,导致实验失败。
在保存抗体时请注意以下几点:
●为保持最大反应性,应按照广家说明书保存试剂 (如,当指定保存温度为2-8°C时,应避免将抗体置于室温下)。
●保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。
●除非加入稳定蛋白,如BSA (1% w/v) ,否则抗体不得在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。
●保存时遇到的主要问题是细菌或真菌污染。如果抗体保存在2-8°C超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。
●叠氮化钠可通过某些偶联方法干扰多种生物实验。因此进行此类实验时最好使用离心透析过滤法、透析法或凝胶过滤法除去叠氮化钠,或使用无叠氮化物的抗体。注意:叠氮化钠有毒。对于所有实验室试剂,处理注意事项均请查阅"材料安全性数据表”(MSDS)。
●抗体为相对稳定的蛋白,能够抵抗较广范围的温和变性条件。当按照生产商的建议条件正确保存时,抗体可保持稳定达数年。
●大多数情况下,抗体保存在-20°C时可不损失其结合能力。
●最好避免在无霜冰箱中保存抗体。这是为了避免或尽量减少冻融循环。抗体溶液不可反复冻融,因为这可导致抗体聚集,从而引起活性丧失。因此,贮存溶液应在保存前先进行分装。
●未稀释抗体应在保存于-20°C之前分装,以尽量减少可使抗体变性的反复冻融循环。集中保存抗体可预防或尽量减少降解。可在抗体溶液中加入终浓度为50%的冷冻保护剂,如甘油,以预防冻融造成的损失。请勿将含甘油的抗体保存于-80°C。
●通常不对酶结合抗体进行冷冻,以免损失酶活性及其结合能力。最好将其保存于+4°C
●抗体上的荧光素较易感光淬灭。因此,荧光结合抗体应在深色瓶中避光保存。
●长期保存时,某些抗体溶液可能产生不溶的成分。沉淀物可通过10000 g快速离心去除
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